人γ干擾素ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人γ干擾素（IFN-γ）水平。用純化的人γ干擾素（IFN-γ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素（IFN-γ），再與HRP標(biāo)記的γ干擾素（IFN-γ）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素（IFN-γ）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人γ干擾素（IFN-γ）濃度。

 

 人γ干擾素ELISA試劑盒 操作方法

 

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：人γ干擾素ELISA試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

 

400 ng/L 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

200 ng/L  4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

100 ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

50 ng/L 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

25 ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

 

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

 

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

 

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

 

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

 

7. 溫育：操作同3。

 

8. 洗滌：操作同5。

 

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

 

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

 

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

檢測(cè)范圍：                                                     

 

10 ng/L -400 ng/L

 

 人γ干擾素ELISA試劑盒 僅用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中γ干擾素（IFN-γ）含量（Attention:For laboratory use only,Not for drug or other uses）。