上海天齊生物科技有限公司作者
由福建省農(nóng)業(yè)*生物技術(shù)研究所承擔的省科技計劃項目“轉(zhuǎn)基因水稻的快速檢測技術(shù)研究”通過了省*組織的專家驗收。
該項目選取了BT類抗蟲基因cry1Ac、cry1Ca、cry30FAa1基因,以及豇豆*抑制劑基因cpti與潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶標記基因hpt,構(gòu)建細菌表達載體并純化了目的蛋白,制備了Cry1Ac、Cry1Ca、Hpt、CPTI蛋白的多克隆抗體,進行了Cry1Ab、Cry1Ac、Hpt蛋白的單克隆抗體制備。
建立了膠體金標記檢測試紙條技術(shù)體系,針對試紙條制備中膠體金顆粒的大小,膠體金標記蛋白zui適用量與pH值,不同膜材的選擇,試紙條規(guī)格,包被液與膠體金重懸液組分等進行了優(yōu)化,探索了*制備工藝,制備了Cry1Ac、Cry1Ca與CPTI的轉(zhuǎn)基因檢測試紙條,并制訂了試紙條中試生產(chǎn)技術(shù)資料與檢測說明書。
通過該技術(shù)制備的膠體金試紙條檢測轉(zhuǎn)cry1Ac與cpti基因水稻植株,與ELISA結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),Cry1Ac試紙條靈敏度為96.0%,特異性為100%,符合率為96.1%;CPTI試紙條靈敏度為91.8%,特異性為94.8%,符合率為93.0%。為轉(zhuǎn)基因水稻選育過程中的檢測奠定基礎(chǔ)。
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