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人8-羥基*DNA糖苷酶(hOGG1)酶聯(lián)免疫分析

2010年10月19日 17:08:21人氣:1463來源:上海酶聯(lián)生物研究所

藥品名稱:
通用名:人8-羥基*DNA糖苷酶(hOGG1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中8-羥基*DNA糖苷酶(hOGG1)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測定標本中人8-羥基*DNA糖苷酶(hOGG1)水平。用純化的人8-羥基*DNA糖苷酶(hOGG1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的8-羥基*DNA糖苷酶(hOGG1)標準品和未知濃度的hOGG1待檢樣品,溫育后,加入*標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的8-羥基*DNA糖苷酶(hOGG1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人8-羥基*DNA糖苷酶(hOGG1)濃度。
試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 50ml×1瓶

9 標準品S1(600nmol/L) 0.5ml×1瓶
2 鏈霉親和素-HRP 6ml×1瓶 標準品S2(400nmol/L) 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 標準品S3(200nmol/L) 0.5ml×1瓶
4 *標記的抗-IgG抗體 6ml×1瓶 標準品S4(100nmol/L) 0.5ml×1瓶
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 標準品S5(50nmol/L ) 0.5ml×1瓶
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1個
7 終止液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
8 樣品稀釋液 6ml×1瓶 12 說明書 1份

標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
1. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品,*標記的抗-IgG抗體,鏈霉親和素-HRP,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl,在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
3. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。
5. 加*標記的抗-IgG抗體:每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl(空白孔除外)。37℃溫育30分鐘
6. 洗滌:操作同4。
7. 加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP(空白孔除外),輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌:操作同4。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
線形范圍:
30nmol/L -700nmol/L
規(guī)格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

關(guān)鍵詞:酶標儀
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