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當前位置:上海金穗生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>in vivo凋亡檢測
若想要標記凋亡細胞,只需靜脈注射此探針,讓其在體內(nèi)循環(huán)。當探針遇上激活的caspase時,反應(yīng)性的半*與caspase異源二聚體的大亞基之間形成不可逆的共價鍵。結(jié)合的探針保留在細胞內(nèi),直至細胞膜損傷,逐漸損失較大的蛋白。未結(jié)合的探針就會被動物的循環(huán)系統(tǒng)快速清除,但會在肝臟中保留3-4小時,并積累在膀胱和糞便中,直至排出。動物體內(nèi)剩下的信號就是對caspase活性的直接測定。有了直接的in vivo標記,探針才能真正代表實驗條件所引起的凋亡,而不是組織的體外操作所引起的凋亡。
探針的活體使用對藥物測定研究很有價值,因為通過活體動物的熒光成像可測定藥物反應(yīng)性所引起的凋亡水平升高或降低。凋亡水平的升高使得粘附的探針更多,因此熒光強度增加。此外,活體技術(shù)避免了從動物上取出細胞和組織的需要,這會進一步誘導(dǎo)凋亡。
DyLight 690和DyLight 747細胞凋亡體內(nèi)檢測試劑盒中的探針大約能夠注射10只小鼠,價格為4430元。賽默飛世爾也提供DyLight 690和DyLight 747體內(nèi)對照試劑,價格為2780元,也可以使用10次。索取資料
膜檢測
Sigma-Aldrich公司也推出了一款A(yù)po-TRACE體內(nèi)凋亡檢測試劑盒,不過是檢測凋亡中的膜變化。此款產(chǎn)品能實現(xiàn)凋亡細胞的體內(nèi)染色和Apo-TRACE累積的定量分析。
Apo-TRACE是一種無毒的有機小分子,屬于ApoSense™低分子量化合物家族中的一員。ApoSense化合物對膜電位改變和磷脂紊亂作出反應(yīng),這些也是早期凋亡的特征。一旦注入體內(nèi),化合物即可標記凋亡細胞。Apo-TRACE化合物具有固有的熒光特性(328 nm激發(fā),563 nm發(fā)射),并在活體內(nèi)凋亡細胞的膜上積累。通過測定器官或組織中細胞上積累的熒光染料,即可定量評估凋亡細胞。由于大部分抗癌療法都通過誘導(dǎo)凋亡而起作用,故Apo-TRACE的染色可指示療法是否有效。
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