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上海一基實業(yè)有限公司

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9015-85-4T4 DNA連接酶/T4 DNA Ligase9015-85-4

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  • 上海一基實業(yè)有限公司
  • 2017-11-03 17:40:56
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【簡單介紹】

上海一基實業(yè)有限公司主要從事實驗室設備,免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。并代理銷售多個國外,致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術服務。咨詢
:,60526762, 60526763 ,.

【詳細說明】

  

M0094 T4 DNA連接酶/T4 DNA Ligase BR,1u/ul LC200u 9015-85-4
      LC1000u  
    BR,1u/ul,PEG LC200u  
      LC1000u  
    BR,5u/ul 200u  
      1000u  
    BR5u/ul,PEG 200u  
      1000u  
    BR,30u/ul HC1000u  
      HC5000u  
    BR30u/ul,PEG HC1000u  

英文名稱:T4 DNA Ligase
CAS號:9015-85-4

級別:BR
分子量:55.3kDa,單體
來源:含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
濃度:1u/ul(200CEU/ul)
活性定義:是指在ATP-PPi交換反應中,37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉換為Norit可吸收形式所需的酶量(weiss單位,1個weiss單位相當于約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位:20ul反應體系(50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端)中,在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量)
酶活性分析混合物:66mM Tris-HCL(PH7.6), 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液組分:20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT,0.1mM EDTA和50%(v/v)甘油
10×T4 DNA Ligase緩沖液(#B69):400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP(PH7.5,25℃)
50% PEG溶液:50%(w/v)聚乙二醇4000
抑制劑:當反應體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時,可強烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活:65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意:聚乙二醇(PEG)可*地增加平末端DNA的連接效率,PEG4000在反應體系中的*濃度為5%(w/v);T4 DNA Ligase與DNA結合會改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率,為避免此現(xiàn)象,電泳前需處理樣本或分子量標準。樣本處理如下:樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液(#R1151)混合,75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存;轉化時,連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細胞體積中的10%;電轉化之前,先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase,然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
質量控制:測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測:粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀:液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵,還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復合體中的單鏈切口,連接DNA的粘性和平末端,但該酶對單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途:生化研究。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接;雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接;雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復合體中缺口的修復;連接酶介導的RNA檢測;位點特異性突變;擴增片段長度多態(tài)性
保存: -20°C

    
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