適用儀器

樣品實驗方案

簡要概述

1.在生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞4-6小時
2.將細胞轉(zhuǎn)移到無血清培養(yǎng)基中1小時，并根據(jù)需要處理細胞
3.加入100μL/孔的脂肪酸染料加載溶液
4.監(jiān)測熒光增加在Ex / Em = 485/515 nm處立即進行動力學(xué)或在孵育60分鐘后進行終點讀數(shù)（底部讀取模式）

溶液配制

1.儲備溶液配制

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
TF2-C12脂肪酸原液：
將20μLDMSO（組分C）加入到TF2-C12脂肪酸（組分A）的小瓶中并充分混合。 注意：20μL熒光脂肪酸底物原液足以用于一個平板。 如果將管密封并避光，可以將未使用的熒光脂肪酸底物儲備溶液等分并在<-20℃下儲存長達兩個月。 避免反復(fù)凍融循環(huán)

2.工作溶液配制

脂肪酸染料加載溶液：
將20μLTF2-C12脂肪酸儲備溶液加入10mL分析緩沖液（組分B）中并充分混合。 注意：10毫升脂肪酸染料加載溶液足以用于一個平板; 為每個平板做準備并進行實驗。

操作步驟

1.根據(jù)需要用測試化合物處理細胞。

2.從培養(yǎng)箱中取出化合物處理的細胞板，加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）（包括空白孔）的脂肪酸染料加載溶液。

3.使用底部讀取模式，使用熒光酶標儀在Ex / Em = 485 / 515nm（在495nm處截止）測量熒光信號。 注意：對于動力學(xué)讀數(shù)：立即以20秒間隔讀取熒光強度30-60分鐘。 注意：對于終點讀數(shù)：讀取30-60分鐘孵育結(jié)束時的熒光強度。

數(shù)據(jù)分析