樣品分析

概述

準(zhǔn)備樣品（微孔板孔）從板上取下液體

加入100μL/孔的iFluor 546-鬼筆環(huán)肽溶液

在室溫下染色細(xì)胞15到60分鐘洗滌細(xì)胞

使用TRITC通道在顯微鏡下觀察樣品（Ex / Em = 550/575 nm）

注意：打開前將所有組件加熱至室溫

操作步驟

1.準(zhǔn)備1X iFluor 546-鬼筆環(huán)肽工作溶液：

將10μL的iFluor 546-鬼筆環(huán)肽（組分A）加入10mL標(biāo)記緩沖液（組分B）中。

注意1：未使用的1X iFluor 546-鬼筆環(huán)肽原液應(yīng)等分并保存在-20 ℃，避光。

注意2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。 應(yīng)相應(yīng)地制備iFluor 546-鬼筆環(huán)肽工作溶液的濃度。

2.染色細(xì)胞：

2.1執(zhí)行甲醛固定。 在室溫下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育細(xì)胞10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因?yàn)榧状紩?huì)在固定過程中破壞肌動(dòng)蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS沖洗固定的細(xì)胞2-3次。

2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細(xì)胞（步驟2.2）3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。

2.4將100μL/孔（96孔板）的iFluor 546-鬼筆環(huán)肽工作溶液（來自步驟1）加入固定的細(xì)胞（來自步驟2.2或2.3），并在室溫下將細(xì)胞染色15至60分鐘。

2.5用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以去除多余的染料，然后使用TRITC通道進(jìn)行板密封和成像。

       圖1.用甲醛固定并用Cell Navigator F-肌動(dòng)蛋白標(biāo)記試劑盒染色的CPA細(xì)胞的圖像*在Costar黑色96孔板中的橙色熒光* A：用1X iFluor 546-鬼筆環(huán)肽標(biāo)記細(xì)胞僅30分鐘。 B：用鬼筆環(huán)肽處理細(xì)胞10分鐘，然后用1X iFluor 546-鬼筆環(huán)肽染色30分鐘。