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公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

3、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)

晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

收到細(xì)胞后如何操作:

1、首先，觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)及時(shí)與我司技術(shù)支持聯(lián)系。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，隔天再取出進(jìn)行觀察。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

4、可將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中，備用；細(xì)胞傳代時(shí)，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

5、確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時(shí)將細(xì)胞凍存，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，避免后期實(shí)驗(yàn)失誤可能發(fā)生細(xì)胞污染或死亡而導(dǎo)致的細(xì)胞丟失。

6、建議客戶收到細(xì)胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我們技術(shù)支持溝通交流。

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

NeuroD1： 神經(jīng)細(xì)胞分化因子1抗體 RELT Others Human 人 RELT / TNFRSF19L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B 大鼠尿苷二0酸葡萄糖酸轉(zhuǎn)移酶2(UGT2)ELISA試劑盒 E(Mouse estrogen)  小鼠雌激素 96T

NFAT2： 活化T細(xì)胞核因子1蛋白抗體 敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21

人毛發(fā)基質(zhì)細(xì)胞(HHZMC)( 5×105 ) mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞 Mouse 大鼠尿苷二0酸葡萄糖酸轉(zhuǎn)移酶2(UGT2) ELISA試劑盒 Ang- I  大鼠血管緊張素Ⅰ 96T

NMDAR1： 谷酸受體1抗體 小鼠骨髓瘤細(xì)胞;P3/NSI/1-Ag4-1

KDM1： 組蛋白賴酸特異性脫甲基酶1抗體 C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞

EFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽) 牛檢測(cè)(e)ELISA 試劑盒 Agrin peptide 聚集蛋白抗原 0.5mg

KIF11： 驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白1抗體 ENPEP Others Rat 大鼠 ENPEP / Aminopeptidase A (aa 41-945) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 牛呼腸孤病毒B-19株(RV-B19)ELISA試劑盒 ATP citrate lyase/ACLY 三0酸腺檸檬酸裂解酶 0.5mg

KMT3B： 組蛋白甲基化KMT3B抗體 RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞 NCYC 234[IPAZSC 148]細(xì)胞 COS-7(SV40 轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞)

3D4/21豬肺泡巨噬細(xì)胞Semaphorin 3D： 跨膜蛋白SEMA3D抗體 牛腎細(xì)胞;MDBK(NBL-1)

CM-R059大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 大鼠S100鈣結(jié)合蛋白A8(S100A8)ELISA試劑盒 NHE3(Human Na+/H+ exchanger 3)  人Na+/H+交換體3 96T

Septin 11： 細(xì)胞分化蛋白SEPT11抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞ROPC 大鼠S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)ELISA試劑盒 OFQ/N(Human orphanin FQ/nociceptin)  人孤腓肽 96T

Six3： 晶狀體發(fā)育相關(guān)蛋白Six3抗體 AGS(人胃腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2