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公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

3、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)

晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

收到細(xì)胞后如何操作:

1、首先，觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請及時與我司技術(shù)支持聯(lián)系。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，隔天再取出進(jìn)行觀察。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

4、可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中，備用；細(xì)胞傳代時，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

5、確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時將細(xì)胞凍存，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，避免后期實(shí)驗(yàn)失誤可能發(fā)生細(xì)胞污染或死亡而導(dǎo)致的細(xì)胞丟失。

6、建議客戶收到細(xì)胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我們技術(shù)支持溝通交流。

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

LRRFIP1： 巨噬細(xì)胞調(diào)控相關(guān)蛋白LRRFIP1抗體 MAPKAPK5 Others Human 人 MAPKAPK5 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白6(TSG-6)ELISA試劑盒 Rabbit IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記兔IgM 0.1ml

LH beta： 促黃體生成素抗體 KM3, 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 肝癌細(xì)胞,HCC-9204細(xì)胞 NCI-H292(肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移))

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)因子(TWEAK)ELISA試劑盒 Rat IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記大鼠IgM 0.1ml

LIMS1： 整合素和生長因子樣蛋白1抗體 敘利亞倉鼠肌肉細(xì)胞;GH-M1

GGT2 light chain： γ谷酰轉(zhuǎn)肽酶2輕鏈抗體 SEMA4D Others Cynomolgus 食蟹猴 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 人可替丁(Cotinine)ELISA試劑盒 Caspase-13 半胱胺酸蛋白酶蛋白-13(抗原) 0.5mg

GGT5 light chain： γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶5輕鏈抗體 家貓肺細(xì)胞;FCA-L1 羊膜細(xì)胞，Ha Fe細(xì)胞 BaF3細(xì)胞，小鼠原B細(xì)胞株

ACVR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人可提取核抗原(ENA)ELISA 試劑盒 CD19(B-lymphocyte antigen CD19) CD19 0.5mg

GGT7 light chain： γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶7輕鏈抗體 原代神經(jīng)元細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml

A2780+GFP人卵巢癌細(xì)胞+GFPPBX3： B淋巴細(xì)胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子3抗體 貓腎細(xì)胞;F81

人羊膜上皮細(xì)胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞 Mouse 大鼠金屬硫蛋白2(MT-2)ELISA試劑盒 AFA/snoRNP/U3RNP(Human anti-fibrillarin antibody)  人抗核仁纖維蛋白抗體 人前脂肪細(xì)胞-皮下總RNAHPA-s NA

TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠金屬硫蛋白1(MT1)ELISA試劑盒 15-LO/LOX(Mouse 15-lipoxygenase)  小鼠15脂加氧酶 96T

P4HB： 蛋白二硫鍵異構(gòu)酶P4HB抗體 METAP1D Others Human 人 MAP1D / Methionine Aminopeptidase 1D 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

EC9706 食管癌 大鼠金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒 HA  大鼠透明質(zhì)酸 96T