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更新時間：2018-06-08 15:44:05瀏覽次數(shù)：221次
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非酶DNA清除劑用Trizol等方法提取的細(xì)胞總RNA樣品中經(jīng)常會含有基因組DNA污染，這些污染會影響下游的RT-PCR和Northern雜交等實(shí)驗(yàn)。目前較常用的RNase-free DNase處理方法因DNase中所含殘留的RNase能破壞RNA完整性而具有很大缺陷。LMAI Bio開發(fā)的不但*避免了RNase-free DNase的這一缺陷，同時還具有操作快速，穩(wěn)定性好和性價
非酶DNA清除劑
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
非酶DNA清除劑 | 1.5mL | 490元 |
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用Trizol等方法提取的細(xì)胞總RNA樣品中經(jīng)常會含有基因組DNA污染，這些污染會影響下游的RT-PCR和Northern雜交等實(shí)驗(yàn)。目前zui常用的RNase-free DNase處理方法因DNase中所含殘留的RNase能破壞RNA完整性而具有很大缺陷。LMAI Bio開發(fā)的不但*避免了RNase-free DNase的這一缺陷，同時還具有操作快速，穩(wěn)定性好和性價比高等諸多優(yōu)點(diǎn)，*可以替代價格昂貴的RNase-free DNase。
1. 高效，能使總RNA中的基因組DNA污染降上百倍（根據(jù)PCR檢測）而RNA分子完整性不會受到任何影響。
2. 不含RNase污染，所用溶液又經(jīng)過LMAI Bio的液相RNase清除劑的處理（能不可逆地滅活RNase）。
3. 快速，全部操作在樣品管中完成，只需要十多分鐘，不需要37℃保溫和酚/抽提。
4. 穩(wěn)定，本產(chǎn)品為非酶產(chǎn)品，可以常溫運(yùn)輸和4℃長期保存；而RNase-free DNase的運(yùn)輸和長期保存必須在低溫進(jìn)行。
5. 性價比高，單位成本遠(yuǎn)低于RNase-free DNase。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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