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AD494（DE3）大腸桿菌

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產品簡介

AD494（DE3）大腸桿菌AD494菌株來源于K12菌，有助于蛋白的形成正確的三維結構。AD494菌株含有thioredoxin reductase （TrxB）基因突變，有利于細菌胞內的二硫鍵形成，能夠幫助蛋白形成正確的三維折疊，形成有功能活力的蛋白。AD494菌株中的thioredoxin reductase （TrxB）突變具有卡那霉素抗性，因此該宿主菌只能用于氨芐或者其他非卡那霉素抗性的

詳細介紹

AD494(DE3)大腸桿菌

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AD494(DE3)大腸桿菌	1 管	詢價

AD494菌株來源于K12菌，有助于蛋白的形成正確的三維結構。AD494菌株含有thioredoxin reductase (TrxB)基因突變，有利于細菌胞內的二硫鍵形成，能夠幫助蛋白形成正確的三維折疊，形成有功能活力的蛋白。AD494菌株中的thioredoxin reductase (TrxB)突變具有卡那霉素抗性，因此該宿主菌只能用于氨芐或者AD494(DE3)大腸桿菌其他非卡那霉素抗性的質粒，進行基因蛋白表達。 DE3是溶源性的 λDE3, 所以帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體，及其他T7啟動子系列載體。能夠利用IPTG直接進行蛋白的誘導表達。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，AD494(DE3)大腸桿菌離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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