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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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| 參考價 | 面議 |
- 型號 48T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-07-16 12:20:53瀏覽次數(shù)：297
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實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：RNA擴(kuò)增試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP100292
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品分類：恒溫擴(kuò)增法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
釀酒酵母FAHD1蛋白抗體Human CNTLN (Centlein) ELISA KIT過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPARG)免疫試劑盒
解淀粉芽孢桿菌磷酸化粘著斑激酶抗體Human CHPT1 (Cholinephosphotransferase 1) ELISA KIT過氧化氫酶(CAT)免疫試劑盒
釀酒酵母磷酸化粘著斑激酶抗體Human CHKB (Choline/ethanolamine kinase) ELISA KIT果糖(FRA)免疫試劑盒
施氏假單胞菌下頜發(fā)育不良綜合征相關(guān)蛋白FAKD3抗體Human DAB1(Disabled homolog 1) ELISA Kit胱抑素C(CST3/Cys-C)免疫試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞菌FAM134B蛋白抗體Human CENPT (Centromere protein T) ELISA KIT胱天蛋白酶9(Casp-9)免疫試劑盒
地下枝芽孢桿菌磷酸化范可尼貧血組蛋白A抗體Human CDCA7L (Cell division cycle-associated 7-like protein) ELISA KIT胱天蛋白酶8(Casp-8)免疫試劑盒
青霉屬范可尼綜合征相關(guān)蛋白FANCC抗體Human CGREF1 (Cell growth regulator with EF hand domain protein 1) ELISA KIT胱天蛋白酶7(Casp-7)免疫試劑盒
雙倒卵形紅冬孢酵母菌FXYD離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子6抗體Human CHKA (Choline kinase alpha) ELISA KIT胱天蛋白酶6(Casp-6)免疫試劑盒
葡萄座腔菌Fyn結(jié)合蛋白抗體Human CHKB (Choline/ethanolamine kinase) ELISA KIT胱天蛋白酶3(Casp-3)免疫試劑盒
泡盛曲霉鋅指蛋白FYCO1抗體Human CHPT1 (Cholinephosphotransferase 1) ELISA KIT胱天蛋白酶1(Casp-1)免疫試劑盒
布氏乳桿菌FYTTD1蛋白抗體Human CNTLN (Centlein) ELISA KIT骨鈣素/骨蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒
MethylobacteriumRNA結(jié)合蛋白9抗體Human CHRM1 (Muscarinic acetylcholine receptor M1) ELISA KIT骨成型蛋白受體1B(BMPR-1B)免疫試劑盒
產(chǎn)單核李氏桿菌巖藻糖轉(zhuǎn)移酶11抗體Human CENPT (Centromere protein T) ELISA KIT過氧化酶(GSH-Px)免疫試劑盒
香菇屬干擾素誘導(dǎo)蛋白15抗體Human CENPV (Centromere protein V) ELISA KITS轉(zhuǎn)移酶A1(GSTA1)免疫試劑盒
白靈側(cè)耳P38相互作用蛋白抗體Human ABCA1(ATP-binding cassette sub-family A member 1) ELISA Kit鉤端螺旋體(Leptospira)抗體(IgG)免疫試劑盒
無花果曲霉鈣粘樣蛋白28抗體Human CHEK1 (Serine/threonine-protein kinase Chk1) ELISA KIT睪酮(T)免疫試劑盒
RNA擴(kuò)增試劑盒: 產(chǎn)阿拉伯糖醇漢遜酵母 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品羅漢果皂苷ⅡA2
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品，>99.5%(HPLC)羅漢果皂苷ⅢA1
鏈格孢Alternaria│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%靈芝酸A
米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=2%異-羅漢果皂苷 V
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.6%羅漢果皂苷IVa
腐生葡萄球菌Staphylococcus│saprophyticus 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4%3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[
香菇Lentinula│edodes 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=6%白頭翁皂苷B
