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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：非洲豬瘟（ASFV）定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP100108
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
白僵菌21號(hào)染色體開放閱讀框62抗體Human VACM-1(Cullin 5) ELISA Kit人血管緊張素1-7(Ang1-7)免疫試劑盒

傳染性喉氣管炎病磷酸化胞漿型磷脂酶A2抗體Human TSC2(Tuberous Sclerosis Protein 2) ELISA Kit人血管活性腸肽(VIP)免疫試劑盒

釀酒酵母9號(hào)染色體開放閱讀框46抗體Human Rbx2(RNF7) ELISA Kit人血管動(dòng)蛋白(AMOT)免疫試劑盒

矩圓黑盤孢20號(hào)染色體開放閱讀框103抗體Human CD72(B-cell differentiation antigen) ELISA Kit人旋毛蟲抗體(Trichinella Ab)免疫試劑盒

硬水黃桿菌9號(hào)染色體開放閱讀框86抗體Human anti 21-OH Ab(anti 21-hydroxylase antibody) ELISA Kit人溴脫氧核苷(BrdU)免疫試劑盒

中型艾美耳球蟲鈣粘附分子18抗體Human Asprosin ELISA Kit人雄烯二酮(ASD)免疫試劑盒

平菇CD276抗體Human 8-iso-PGF2α(8-isoprostane) ELISA Kit人雄烯二免疫試劑盒

粘質(zhì)沙雷氏菌21號(hào)染色體開放閱讀框25抗體Human anti-EPO antibody(anti-Erythropoietin antibody) ELISA Kit人雄激素受體(AR)免疫試劑盒

球孢白僵菌22號(hào)染色體開放閱讀框36抗體Human fFN(fetal Fibronectin) ELISA Kit人胸腺依賴性抗原(TD-Ag)免疫試劑盒

假蜜環(huán)菌（亮菌）補(bǔ)體組分1q子成分樣蛋白1抗體Human LIPE(Hormone-sensitive lipase) ELISA Kit人(TP-5)免疫試劑盒

1B2A3 CD44抗體Human 2, 5-OAS(2, 5-oligoadenylate synthetase) ELISA Kit人β4(Thymosin β4)免疫試劑盒

黃薄芝9號(hào)染色體開放閱讀框114抗體Human MDA(Malonyldehyde) ELISA Kit人α1(Thymosin α1)免疫試劑盒

大腸桿菌CD8β鏈（CD8-β）抗體Human IL-12RB1(Interleukin-12 receptor subunit beta-1 78) ELISA Kit人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)免疫試劑盒

銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)6號(hào)染色體開放閱讀框1抗體Human NPTN(Neuroplastin) ELISA Kit人胸腺基質(zhì)淋巴生成素(TSLP)免疫試劑盒

考克氏菌γ晶狀體蛋白S/γS-crystallin抗體Human AP12(Apelin 12) ELISA Kit人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)免疫試劑盒

解脂假絲酵母解脂變種9號(hào)染色體開放閱讀框72抗體Human HGS(Hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substRate) ELISA Kit人胸腺非依賴性抗原(TI-Ag)免疫試劑盒
非洲豬瘟（ASFV）定性PCR檢測試劑盒: 蘇云金芽胞桿菌 質(zhì)量規(guī)格：>98%甲狀腺球蛋白試劑盒;Hesperidin

阿穆斯基灣鹽水桿菌Salinibacterium│amurskyense 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品甲狀腺結(jié)合球蛋白試劑盒川續(xù)斷皂苷乙;dipsacoside B