試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1.   酶標(biāo)儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。

2.   洗板機（可調(diào)注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。

3.   超凈工作臺，生物安全柜，通風(fēng)柜。

4.   高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5.   高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).

6.   37℃恒溫箱。

7.   低溫離心機。

8.   電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.漩渦混合儀，低頻振蕩器等

注意．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放，時間做相應(yīng)溫度調(diào)整，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細(xì)介紹）。

操作程序

1． 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑系統(tǒng)提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執(zhí)行：

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3． 加樣:(詳細(xì)操作流程請客服索要說明書）

4． 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。

5． 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6． 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。

7． 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

8． 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。

結(jié)果判斷

1.每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸）

2.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來計算。

3．手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析計算結(jié)果。

4．若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。