試劑盒名稱:豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒
檢測用所有試劑全部都為進口試劑,適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本,靈敏度*,多年專業(yè)酶免服務,我們保證對所售任何產(chǎn)品一概負責到底,每一份實驗結果都真實可靠!各檢測項目酶免(ELISA)試劑盒具備,*,定貨及時,送貨上門.此外,我公司還提供樣本代測服務。
規(guī)格:48T/96T
豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒 組織樣品前處理:
①1g組織切碎后加5倍體積的TBS,用均質器均質(10次)。 組織勻漿5000×g,4℃離心20分鐘
TBS:50 mmol/L Tris-HCl , pH 7.6, 150 mmol/L NaCl , 蛋白酶抑制劑 [0.1 mmol/L 二異丙基氟磷酸鹽 , 0.5 mmol/L 苯甲磺酰氟 , 1 g/mL甲苯磺酰-L-賴氨酸氯甲基酮鹽酸鹽, 1 g/mL抗痛素, 0.1 g/mL亮肽素]
②沉淀物懸浮與5倍體積的TBA/蛋白酶抑制劑(含1 mol/L蔗糖),5000×g,4℃離心20分鐘。
③沉淀物中加入3倍體積的1%Triton X-100/TBS/蛋白酶抑制劑,勻質(10次)。37℃孵育15分鐘后,5000×g離心20分鐘。
④沉淀物和勻質物中加入3倍體積的2%SDS/TBS/蛋白酶抑制劑到。組織勻漿37℃孵育15分鐘后,500000×g 25℃離心。
⑤沉淀物中加1mL 70%蟻酸到,超聲破碎后5000×g 4℃離心
⑥收集上清液并用離心濃縮(Speed Vac)干燥。加100μL DMSO并短時超聲破碎成懸液。零下80℃儲存這個DMSO-蟻酸溶解的改組織溶液直到使用。
⑦檢測時,依照說明書所寫,用試劑盒中的標準稀釋液溶解樣本。
操作步驟:
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加*標記抗體工作液 100μl(取1μl*標記抗體加99μl*標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。
溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同*標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
產(chǎn)品訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當日價格為準。
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