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人類尿液中的腎上皮細(xì)胞研究
點(diǎn)擊次數(shù)：511 發(fā)布時(shí)間：2012-11-12
通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞活力、培養(yǎng)基中的丙二醛（MDA）含量和細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性的變化研究細(xì)胞損傷的程度;利用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞損傷前后骨橋蛋白（OPN）表達(dá)水平的變化;采用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察細(xì)胞損傷前后形貌和膜表面微結(jié)構(gòu)的變化。采用過(guò)氧化氫（H2O2）對(duì)人類腎臟近端小管上皮細(xì)胞系（HKC）進(jìn)行氧化損傷,建立損傷的細(xì)胞模型
廣州生物醫(yī)藥與健康研究院MiguelA.Esteban研究組和裴端卿研究組提出人類尿液中的腎上皮細(xì)胞是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）的理想來(lái)源之一。這一方法相比其他方法更簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，所產(chǎn)生的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞表現(xiàn)出很好的分化能力。
研究人員表示由于分離尿液細(xì)胞非常的簡(jiǎn)單，30ml尿液便已足夠，這一方法有利于大多數(shù)情況，符合成本效益，通用，適合于應(yīng)用各個(gè)年齡、性別和種族。此外，整個(gè)的程序相當(dāng)快速，iPSC克隆產(chǎn)率普遍較高可達(dá)4%。尿iPSCs（UiPSCs）也顯示出*的分化潛能，因此代表了生成來(lái)自正常個(gè)體或遺傳病患者多能細(xì)胞的一個(gè)*的選擇。
為了減輕患者不必要的痛苦，研究人員提出了分離尿細(xì)胞誘導(dǎo)生成iPSCs的方法。研究人員首先對(duì)57名個(gè)體進(jìn)行了尿液樣本收集，從42名個(gè)體處成功獲得原代細(xì)胞培養(yǎng)物。之后，研究人員在分別進(jìn)行了二、三及第四次嘗試，總體成功率達(dá)到近82%。隨后，采用10%的胎牛血清培養(yǎng)基將原始細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)促使其貼壁及存活。利用腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增。細(xì)胞培養(yǎng)2-3周后，即可用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染方法將外源因子導(dǎo)入尿細(xì)胞中，重編程過(guò)程需3-4周，出現(xiàn)培養(yǎng)干細(xì)胞樣的克隆，再將這些克隆跳出來(lái)繼續(xù)培養(yǎng)，zui終可獲得穩(wěn)定的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。