檢查試管是否干燥、潔凈，若否，則將其洗凈并置于干燥箱內120℃烘干。

1.標準曲線的制作

    取普通清潔試管7支，標號，1號管為空白，2～7管用微量注射器分別加1.0mg/mL的牛血清白蛋白（即標準蛋白質）溶液10，20，40，60，80，100mL。各管均用0.015mol/L PBS緩沖液補充到100mL（即0.1mL），詳見表6-1?；靹虼谩?/p>

表13-1標準曲線的制作

2.將待測蛋白配成合適濃度

    另取3支清潔試管，編號8、9、10，用微量注射器按表6-2操作，將待測蛋白配成系列濃度。

表13-2待測蛋白的稀釋

3.加入G250試劑

    各試管充分混勻后，用取樣器分別加入5.0mL考馬斯亮蘭G250試劑，每加完一管，立即混合（注意不要太劇烈，以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除）。

4.比色

    各管室溫靜置2～5min后，在分光光度計上測定595nm處的光吸收值A ₅₉₅ ，空白對照為第1號試管，標準和待測蛋白樣同時比色。

    注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），只能使用玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇潤洗，洗去顏色。

5.制作標準曲線

    以標準蛋白質濃度（mg/mL）為橫座標、吸光度值A ₅₉₅ 為縱座標作圖，即得到一條標準曲線。

6.根據(jù)標準曲線計算待測蛋白濃度

    在標準曲線上，根據(jù)測出的待測樣品的A ₅₉₅ 值，查出試管中蛋白質濃度，再按照計算公式：

    計算出待測蛋白濃度。如樣品稀釋合理且操作得當，待測蛋白的三個數(shù)值應具有同一性，取其平均值作為待測蛋白濃度。如某一光吸收值落在標準曲線線性范圍外，舍棄該點。

計算

結果：待測蛋白質的濃度為：         mg/mL