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免疫金銀染色（IGSS）操作流程

時(shí)間：2012-10-13閱讀：604

（一）石蠟切片IGSS

（1）切片脫蠟至水。

（2）0．1％胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修復(fù)20min（98℃），自然冷卻至室溫。

（3）0．05mol/L（pH7．4）TBS洗3×3min。

（4）l％EA（卵蛋白）15min，不洗。

（5）適當(dāng)稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h，或37℃孵育1h。

（6）0．05m01/L（pH7．4）TBS洗3×5min。

（7）0．02m01/L（pH7．4）TBS（內(nèi)含0．1％BSA）洗10min。

（8）1％EA 15min，不洗，1：10～1：20稀釋的PAGlonm室溫孵育1h，或37℃孵育30min。

（9）0．05mol/L（pH7．4）TBS洗10min。

（10）1％戊二醛洗10min。

（11）雙蒸水洗5min。

（12）1％明膠洗5min。

（13）銀避光顯影8～15min。

（14）雙蒸水洗15min。

（15）固定：用顯影定影液（1：4或1：10）固定5min，也可以用15％硫酸鈉-20％*混合液固定1～3min，或用1％戊二醛固定5min，50℃溫水洗3～6min。

（16）襯染，核固紅襯染3min或甲基綠襯染3min。

（17）常規(guī)脫水，二甲苯透明，常規(guī)樹(shù)膠封片。

（18）鏡檢：陽(yáng)性物質(zhì)呈黑色或黑褐色，顆粒分布于抗原—抗體反應(yīng)部位；背景較干凈，呈紅色。

胃未分化癌IGSS-P53 HCC IGSS-HBsAg

核內(nèi)內(nèi)呈黑色陽(yáng)性表達(dá)，背景為紅色，×400 細(xì)胞漿內(nèi)呈黑色陽(yáng)性，×200

（二）冰凍切片IGSS

做冰凍切片的組織可先經(jīng)過(guò)固定再作切片，也可先制作冰凍切片，然后再固定。這要根據(jù)保存抗原的需要而定，固定過(guò)的組織可用含20％蔗糖的PBS（0．1mol/L，pH7．4）浸泡過(guò)夜，使切片減少冰結(jié)晶，保持組織細(xì)胞良好的形態(tài)結(jié)構(gòu)。切片人0．05mol/L（pH7．4）TBS洗3×3min，染色步驟同石蠟切片。



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