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蝦堿性磷酸酶 (SAP)

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蝦堿性磷酸酶 (SAP)

詳細(xì)介紹

性能經(jīng)證實(shí) – 基準(zhǔn)磷酸酶
?在 65°C 下 15 分鐘內(nèi)可達(dá)到 99% 熱滅活
?顯著改善了低溫儲(chǔ)存的穩(wěn)定性（參見圖 1 和 2）
?具有較高的比活度（參見圖 3）
?可去除 DNA、RNA、dNTP 和蛋白中的 5'-磷酸鹽
?從重組來(lái)源純化
?可直接添加到限制性內(nèi)切酶消化物中
?無(wú)需純化載體
?無(wú)需補(bǔ)充鋅或其他活性添加劑
?可直接在多種不同的緩沖液中使用
?在 DNA 測(cè)序或 SNP 分析之前，易于去除 PCR 產(chǎn)物中未摻入的 dNTP

USB Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)
Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) 是一種高比活度、不耐熱型重組堿性磷酸酶，最初從 Pandalus borealis（北極蝦）中分離出來(lái)。SAP 可用于多種分子生物學(xué)應(yīng)用，如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基團(tuán)，用于后續(xù)的克隆和探針末端標(biāo)記。進(jìn)行克隆實(shí)驗(yàn)時(shí)，去磷酸化可防止線性質(zhì)粒 DNA 自連。SAP 也可以用來(lái)去除 PCR 反應(yīng)中的 dNTP，用于制備 DNA 測(cè)序和 SNP 分析模板

蝦堿性磷酸酶與小牛腸堿性磷酸酶（Calf Intestinal Alkaline Phosphatase，以下簡(jiǎn)稱 CIAP）的比活度大致相同，并且與 CIAP 一樣，在幾乎所有限制性內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液中均有活性。與 CIAP 不同的是，通過(guò) 65°C 15 分鐘的熱處理，蝦堿性磷酸酶可不可逆地滅活。

Shrimp Alkaline Phosphatase 特別適用于制備 PCR 產(chǎn)物，用于測(cè)序、SNP 分析或標(biāo)記方法相關(guān)的應(yīng)用。通常，PCR 反應(yīng)后剩余的過(guò)量 dNTP 會(huì)干擾隨后涉及 DNA 合成的酶反應(yīng)。只需一個(gè)簡(jiǎn)單的步驟就可用 SAP 將 PCR 混合物中剩余的所有 dNTP 去磷酸化。

我們還提供了基準(zhǔn)重組磷酸酶。重組 SAP 消除了對(duì)動(dòng)物來(lái)源的依賴，具有較高的儲(chǔ)存穩(wěn)定性和批間一致性等額外優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)具有出色的酶活性，可 99% 熱滅活。

特性：
分子量：同源二聚體。測(cè)定氨基酸序列，得出單體分子量為 55 kDa。
pH 值：溶于緩沖液時(shí) pH 值 10.4，溶于 Tris 緩沖液時(shí) pH 值 8.0。
溫度：37°C
熱滅活：65°C 下 15 分鐘
抑制劑：10 mM DTT，0.1% β-ME
反應(yīng)條件：在 NaCl、KCl 中有活性。需要 Mg²⁺ 以達(dá)到活性。

來(lái)源：
重組

純度：
已檢測(cè)污染性核酸內(nèi)切酶、核酸外切酶和核糖核酸酶。

儲(chǔ)存緩沖液：
25 mM Tris-HCl（pH 值 7.5）、1 mM MgCl2、50% 甘油。

測(cè)定條件：
反應(yīng)混合物含 100 mM （pH 值 10.4）、1 mM MgCl₂、1 mM ZnCl₂、10 mM 對(duì)硝基苯磷酸鹽和 0.001-0.1 單位的 Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)。監(jiān)測(cè) 405 nm 處的吸光度變化（3050 µL 反應(yīng)體積）。

單位定義：
一個(gè)單位是指 37°C 條件下于緩沖液（pH 值 10.4）中每分鐘催化 1 µmol 對(duì)硝基苯磷酸鹽水解所需的酶量。

濃度：
1 單位/µL

功能測(cè)試：
限制性內(nèi)切酶酶切質(zhì)粒的去磷酸化（5 – 20 pmol 5'-末端，0.1 -0.5 單位/pmol 5'-末端）。與未處理的對(duì)照品相比，可將重新連接降至 <>

測(cè)序反應(yīng)或 SNP 分析前核苷酸去磷酸化和引物降解的方案：
請(qǐng)參閱 USB ExoSAP-IT 方案，PCR 純化的基準(zhǔn)。

購(gòu)買 ExoSAP-IT 會(huì)提供使用 Exonuclease I 和 SAP 進(jìn)行 PCR 純化的方法的許可證。

經(jīng)功能測(cè)試的 10X SAP 反應(yīng)緩沖液（隨附，PN 70103）：
200 mM Tris-HCl（pH 值 8.0）、100 mM MgCl₂。

經(jīng)功能測(cè)試的 SAP 稀釋緩沖液（1 mL，隨附，PN 72761）：
50 mM Tris-HCl（pH 值 8.0）。

參考文獻(xiàn)：
1.RUAN, C. C., SAMOLS, S. B. AND FULLER, C. W. (1990) Comments17, (), United States Biochemical Corporation, Cleveland, OH.
2.WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., V?LKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res.22, 4354-4355.
3.HANKE, M. AND WINK, M. (1994) BioTechniques17, 858-860.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.