在 BLOCK-iT™ 慢病毒 RNAi 表達(dá)系統(tǒng)中提供的 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 表達(dá)載體可用于從慢病毒載體中高效引入和體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)短發(fā)夾 RNA (shRNA)。一種新型克隆方法使～50-bp DNA 寡核苷酸緊接著 U6 pol III 啟動子進(jìn)入 BLOCK-iT™ U6 入門載體。寡核苷酸設(shè)計用于表達(dá)可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)的 RNA，該結(jié)構(gòu)包含目的靶基因的正義區(qū)和反義區(qū)。然后將該 shRNA 重組到 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 載體中。病毒產(chǎn)生和轉(zhuǎn)導(dǎo)后，U6 啟動子驅(qū)動的 shRNA 作為 RNAi 盒穩(wěn)定整合。產(chǎn)生的 shRNA 避免了宿主防御機制，并將有效地產(chǎn)生 RNAi 基因敲低反應(yīng)（圖 1）。

pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 載體（圖 2）可提供：

?與包含 RNAi 盒的 attL-flanked U6 Gateway™ 入門載體進(jìn)行有效重組的 attR 位點
?高效慢病毒包裝和目標(biāo) shRNA 遞送所需的所有組分
?用于快速、有效篩選表達(dá) shRNA 的穩(wěn)定細(xì)胞系的殺稻瘟菌素選擇標(biāo)記利用 BLOCK-iT™ 慢病毒 RNAi 表達(dá)系統(tǒng)，可實現(xiàn)分裂和非分裂哺乳動物細(xì)胞類型和動物模型中基因阻斷的長期分析。

BLOCK-iT™ RNAi U6 入門載體試劑盒允許進(jìn)行 shRNA 靶序列的簡化克隆以在瞬時實驗中驗證效果。通過標(biāo)準(zhǔn) Gateway™ LR 重組反應(yīng)，將選定的 RNAi 表達(dá)盒從 BLOCK-iT™ RNAi U6 入門載體快速有效地重組到 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 載體中（圖 3）。

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

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BLOCK-iT™ 慢病毒 RNAi Gateway™ 載體試劑盒

賽默飛世爾科技（中國）有限公司

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