呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品】
用途
用于定性檢測(cè)有癥狀病人鼻沖洗液或*標(biāo)本中的呼吸道合胞病毒（RSV）融合蛋白抗原的免疫層析試驗(yàn)。該試驗(yàn)旨在用于新生兒或5歲以下兒童呼吸道合胞病毒感染的體外診斷。建議陰性結(jié)果做細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)一步證實(shí)。
摘要和解釋
RSV是上呼吸道和下呼吸道感染的常見(jiàn)原因，也是嬰幼兒患細(xì)支氣管炎和肺炎的主要原因。RSV在每年的秋天、冬天和春天有規(guī)律的發(fā)生，出現(xiàn)感染和暴發(fā)。雖然RSV在較大兒童和成人可引起顯著的呼吸道疾病，但比嬰幼兒緩和的多。為了獲得有效的抗菌治療，RSV的快速鑒定診斷就顯得特別重要?？焖勹b定可以減少住院時(shí)間，減少抗菌素的使用，減少住院治療費(fèi)1。
呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）提供了一種簡(jiǎn)便快速檢測(cè)鼻洗液和*標(biāo)本中的 RSV的方法。由于它的簡(jiǎn)便快速性，有助于做出治療和住院的決定。
測(cè)試原理
呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）是一種用鼻洗液和*標(biāo)本檢測(cè)RSV融合蛋白抗原的免疫層析膜試驗(yàn)?？?/span>RSV抗體，樣本線，吸附到硝酸纖維素膜上，對(duì)照抗體作為第二條線吸附到同一膜上?？?/span>RSV和對(duì)照抗體結(jié)合到可視粒子上，這種粒子干燥結(jié)合到惰性纖維支持物上。形成的結(jié)合物墊和有條紋的膜結(jié)合形成檢測(cè)條。檢測(cè)條置于一個(gè)硬紙盒的右邊，這個(gè)硬紙盒是一個(gè)書(shū)形的絞鏈的檢測(cè)裝置。拭子標(biāo)本（對(duì)照和病人的）需要一個(gè)預(yù)備步驟，鼻洗液標(biāo)本不需要預(yù)備。執(zhí)行試驗(yàn)時(shí)，測(cè)試樣本加到檢測(cè)條的頂部的白墊上，閉合檢測(cè)裝置。標(biāo)本中的存在的RSV抗原與抗RSV抗體結(jié)合物結(jié)合，形成的抗原結(jié)合物復(fù)合物被固定的抗RSV抗體捕獲，形成樣本線。固定的對(duì)照線抗體捕獲一個(gè)可視的結(jié)合物，形成一條粉紅色的對(duì)照線。對(duì)照線在未檢測(cè)的裝置中是藍(lán)色的。試驗(yàn)結(jié)果用可視的檢測(cè)的粉紅色到紫色線的存在與否來(lái)解釋。陽(yáng)性結(jié)果，在15分鐘讀數(shù)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)一條樣本線和一條對(duì)照線。陰性結(jié)果，在15分鐘讀數(shù)時(shí)，只出現(xiàn)一條對(duì)照線，表明樣本中未檢測(cè)到RSV抗原。對(duì)照線未出現(xiàn)，或仍為藍(lán)色，表示無(wú)論樣本線出現(xiàn)與否，測(cè)試無(wú)效。
試劑和材料
提供的材料
檢測(cè)卡：包被有鼠抗RSV抗原特異抗體和對(duì)照線抗體的膜與鼠抗RSV抗體結(jié)合物和對(duì)照線抗體結(jié)合物結(jié)合在一個(gè)折合式檢測(cè)卡上。未檢測(cè)的膜在對(duì)照線區(qū)域有一條藍(lán)色線。
移液管：固定體積（100μl）的移液管用于將樣本轉(zhuǎn)移到檢測(cè)裝置中。只能用廠家提供或能轉(zhuǎn)移100μl樣本體積的校正管。
陽(yáng)性對(duì)照拭子：滅活的RSV干燥結(jié)合到拭子上。
陰性對(duì)照拭子；滅活的A群鏈球菌干燥結(jié)合到拭子上。
對(duì)照拭子用的瓶裝洗脫液：盛有一定體積（0.5ml）洗脫液，用于洗脫對(duì)照拭子。不要使用其他洗脫液。
未提供的材料
時(shí)鐘、秒表或跑表；鼻洗液收集容器，*，運(yùn)輸媒介。
可選物品
鼻咽（NP）拭子標(biāo)本附件包：
*：用于呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）的無(wú)菌泡沫拭子。
用于拭子標(biāo)本的洗脫液小瓶：
瓶中盛有一定體積的洗脫液（0.5 ml），用于處理要測(cè)試的拭子標(biāo)本。
注意事項(xiàng)
1． 體外診斷用。
2． 使用前要將檢測(cè)裝置密封在錫箔中。
3． 不要使用過(guò)期的試劑盒。
4． 不要將不同批號(hào)試劑盒的試劑混合使用。
5． 檢測(cè)條頂部的白色樣本墊盛有從病毒中提取靶抗原的試劑，為了保證*操作，加樣時(shí)將標(biāo)本慢慢加到墊的*，以使所有樣本都吸附到墊上。
6． RSV陽(yáng)性對(duì)照拭子是用滅活的RSV感染組織培養(yǎng)細(xì)胞準(zhǔn)備的，隨后用生物測(cè)定程序進(jìn)行了測(cè)試。測(cè)定時(shí)要遵守一切注意事項(xiàng)。樣本可能有感染性，應(yīng)當(dāng)根據(jù)地方、州和聯(lián)邦的法規(guī)建立處理和處置措施。
7． 檢測(cè)中加入的試劑不足時(shí)會(huì)出現(xiàn)無(wú)效結(jié)果。為確保加入足夠量的體積，在將吸管中的內(nèi)容物加到樣本墊上時(shí)，要確定移液管的下部是充盈的、沒(méi)有氣泡產(chǎn)生。如果有空氣存在，通過(guò)擠壓上部的吸球，將標(biāo)本排回到容器中，重新吸入標(biāo)本。必要時(shí)，換一個(gè)新吸管。
8． 測(cè)試鼻洗液標(biāo)本時(shí)，吸樣本時(shí)要避開(kāi)粘液部分。如果吸管堵塞，致使下部柄部不充盈，通過(guò)擠壓上部的吸球把標(biāo)本排回到容器中，重吸樣本，必要時(shí)換一個(gè)新吸管。
9． 聚酯、人造纖維、泡沫和棉花*都有易彎曲的柄，評(píng)估發(fā)現(xiàn)這些都可用于呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）。不要用藻酸鈣*。
10． 所有移液管和洗脫瓶都是單次使用的，不要用于多個(gè)樣本。
貯存和穩(wěn)定性
試劑盒在室溫（59-86℉，15-30℃）保存，呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）在失效期前是穩(wěn)定的。失效期標(biāo)注在外包裝和盒內(nèi)。
標(biāo)本采集和處理
為了取得*結(jié)果，請(qǐng)使用新鮮*或鼻洗液標(biāo)本。
*：
聚酯、人造纖維、泡沫和棉花*都有易彎曲的柄，評(píng)估發(fā)現(xiàn)這些都可用于本試劑盒。將收集后的拭子標(biāo)本在1小時(shí)內(nèi)加入到0.5~3.0ml的適宜的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中。如果不能立即測(cè)定，洗脫液拭子標(biāo)本可在室溫保存4小時(shí)，或2-8℃保存48小時(shí)。測(cè)試前將標(biāo)本平衡至室溫，并輕輕旋動(dòng)。
鼻洗液：
用與病人年齡相稱(chēng)的操作，在標(biāo)準(zhǔn)采樣杯中收集洗液標(biāo)本。如果不能立即測(cè)定，洗液可在室溫保存4小時(shí)，或2-8℃保存48小時(shí)。測(cè)試前將標(biāo)本平衡至室溫，并輕輕旋動(dòng)。洗液標(biāo)本可在測(cè)試前加入到3.0ml的適宜的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中。轉(zhuǎn)移介質(zhì)可導(dǎo)致洗液稀釋?zhuān)@種稀釋可能像操作部分報(bào)道的那樣降低試驗(yàn)敏感性。
轉(zhuǎn)移介質(zhì)：
下列轉(zhuǎn)移介質(zhì)受過(guò)測(cè)試，適用于本試劑盒。
Amies介質(zhì)
Binax洗脫液
Hank,s鹽平衡液
M4介質(zhì)
M4RT介質(zhì)
M5介質(zhì)
鹽水
Stuart,s介質(zhì)
質(zhì)量控制
日常質(zhì)量控制：
呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）內(nèi)嵌有操作對(duì)照。作為日常質(zhì)量控制，健侖生物技術(shù)人員建議每次試驗(yàn)都要記錄這些對(duì)照結(jié)果。
操作對(duì)照
A．未檢測(cè)裝置在對(duì)照位置有一根藍(lán)色線。如果進(jìn)行試驗(yàn)試劑起作用了，檢測(cè)裝置中的這根藍(lán)色線將變?yōu)榉奂t色。
B． 結(jié)果窗口中清晰的背景顏色是陰性背景對(duì)照，15分鐘內(nèi)窗口背景顏色會(huì)從粉紅色到白色。背景顏色不應(yīng)干擾測(cè)試。
外部陰陽(yáng)性對(duì)照：
建議用陰陽(yáng)性對(duì)照確保：
l 所用試劑有效
l 試驗(yàn)操作正確
呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）內(nèi)裝有陰陽(yáng)性對(duì)照拭子。這些拭子將監(jiān)控試劑故障。陽(yáng)性對(duì)照確保測(cè)定準(zhǔn)確。每打開(kāi)一個(gè)新試劑盒都要測(cè)試這些拭子，其他對(duì)照遵照下列要求做：
l 地方、州和/或聯(lián)邦法規(guī)
l 遵照集團(tuán)和/或本試驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制程序
為了正確指導(dǎo)質(zhì)量控制操作，請(qǐng)參閱NCCLS EP12A和42CFR493.1202（C）（*美國(guó)用戶）。
如果未得到正確的質(zhì)控結(jié)果，請(qǐng)不要報(bào)告病人結(jié)果，在工作時(shí)間健侖生物技術(shù)部（EST）。
樣本準(zhǔn)備步驟
鼻洗液：
鼻洗液樣本不需要預(yù)備，直接進(jìn)入測(cè)定程序。
*：
在0.5-3.0ml的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中轉(zhuǎn)動(dòng)洗脫拭子，進(jìn)入測(cè)試程序。注意：如果在洗脫液中洗脫拭子，按照下列程序預(yù)備對(duì)照拭子。
對(duì)照拭子：
1． 試劑盒內(nèi)盛有裝滿洗脫液的小瓶，將瓶蓋開(kāi)啟。
2． 將欲測(cè)試拭子放入瓶中，將拭子在液體中轉(zhuǎn)動(dòng)3圈。
3． 將拭子按在瓶壁上轉(zhuǎn)動(dòng)，使樣本從拭子中移出。
4． 扔掉拭子。
5． 盡早檢測(cè)液體樣本，進(jìn)入檢測(cè)程序。
測(cè)試程序
1． 測(cè)試前將裝置從錫箔中取出平放在工作臺(tái)上。
2． 將移液頭插入液體樣本中，擠壓上部吸球吸液。當(dāng)吸液頭部注滿液體后松開(kāi)吸球，這將會(huì)把液體吸入移液管中。移液管下部不要產(chǎn)生空氣。
3． 看檢測(cè)裝置上的箭頭找到白色樣本墊，通過(guò)擠壓上部吸球，慢慢將移液管中液體全部（100μl）加入到樣本墊的中部。
4． 立即從檢測(cè)裝置中揭去粘附襯，合上并密封裝置，15分鐘時(shí)讀窗口中的結(jié)果。早于或晚于15分鐘結(jié)果可能不準(zhǔn)確。
注意：讀結(jié)果時(shí)，如有必要，將裝置傾斜以減少眩光。
結(jié)果解釋
對(duì)陰性標(biāo)本，窗口底部的藍(lán)色對(duì)照線變紫紅色，無(wú)其他線出現(xiàn)。
對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本，藍(lán)色對(duì)照線變紫紅色，上部的樣本線也變紫紅色。
如果對(duì)照線仍為藍(lán)色或根本沒(méi)有出現(xiàn)，試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效。
對(duì)無(wú)效試驗(yàn)，用一新的檢測(cè)裝置重做。如果問(wèn)題沒(méi)有解決，請(qǐng)廠家或者中國(guó)地區(qū)總代理商廣州健侖生物科技有限公司。
結(jié)果報(bào)告
建議報(bào)告結(jié)果
陽(yáng)性
RSV抗原陽(yáng)性。活病毒存在時(shí)可能出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。
陰性
RSV抗原陰性。由于RSV不能被排除的感染，樣本中的抗原可能在檢出限以下。健侖生物技術(shù)人員建議對(duì)陰性樣本做培養(yǎng)。
局限性
呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）檢測(cè)活的和死的RSV。測(cè)試結(jié)果與標(biāo)本中的抗原量有關(guān)，可能與用同一標(biāo)本做細(xì)胞培養(yǎng)所得結(jié)果不*。
標(biāo)本采集量不足或病毒排出水平低可能出現(xiàn)差一點(diǎn)的結(jié)果，甚至可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
陰性結(jié)果不能排除RSV感染，也不能排除造成呼吸道感染的其他病毒的感染。因此，所得結(jié)果要結(jié)合臨床結(jié)果作出準(zhǔn)確診斷。測(cè)試結(jié)果在用palivizumab治療的病人中還沒(méi)進(jìn)行評(píng)估。
然而一項(xiàng)分析研究表明palivizumab干擾呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）檢測(cè)RSV的能力。
抗菌素和干擾素的干擾潛力還未確定。
單克隆抗體可能不能檢測(cè)所有抗原變異株或新株RSV。
預(yù)期值
RSV的流行年年不同，在秋、冬季暴發(fā)。RSV的陽(yáng)性檢出率受許多因素影響，包括標(biāo)本采集方法，所用試驗(yàn)方法，地理位置，特定區(qū)域的流行。2002年臨床研究中，在洗液標(biāo)本中RSV的平均流行是2%，*標(biāo)本中是4%。2003年收集的*標(biāo)本中RSV的流行是21%。
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參考文獻(xiàn)
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