3T3誘導分化試劑盒

3T3誘導分化試劑盒 產品性能穩(wěn)定，可提高小鼠細胞成骨誘導效率；

 3T3誘導分化試劑盒使用說明 

1. 成脂誘導分化操作

 1.1 接種干細胞 取對數生長期的細胞， 按 照 2.0×10e4 cells/cm2 的細胞密度接種至培養(yǎng)器皿，于 37℃， 5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至匯合度 90~99%，棄掉 上清，加入成脂誘導分化培養(yǎng)基誘導液。 

NOTE：如細胞貼壁性較差，建議使用 0.1%明膠對培養(yǎng)底 面進行包被。

1.2 細胞分化誘導 于 37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約 3 天，更 換為成脂誘導分化培養(yǎng)基維持液，培養(yǎng) 1 天后， 再更換為成脂誘導分化培養(yǎng)基誘導液，繼續(xù)培養(yǎng) 3 天。 按照以上換液頻率誘導 14~21 天，并注意觀 察細胞形態(tài)變化。根據細胞誘導形成的脂滴數量 和大小，決定終止細胞誘導的時間，并進行染色 鑒定。

 2. 染色鑒定

 2.1 細胞固定 吸去培養(yǎng)基使用適量 1×PBS 清洗一次，棄去 后取適量 4%中性覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室 溫固定 30~60 min，棄去固定液再使用 1×PBS 清 洗兩次。 

2.2 油紅 O 染色 取生理鹽水或1×PBS與油紅O原液配制油紅 O工作液（油紅O原液: 生理鹽水=3:2），現(xiàn)用現(xiàn) 配。配制后可對油紅O工作液進行離心，以沉淀 染色液中的過飽和析出物。向清洗干凈的誘導孔 內加入適量油紅O工作液，靜置染色30min。吸走 油紅O工作液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1 ×PBS避免細胞干燥。

 2.3 誘導評估

 顯微鏡下觀察成脂染色效果，并進行圖像采 集和誘導評估。誘導成功時，脂滴與油紅 O 染料 結合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。 NOTE: 干細胞的成脂分化水平因細胞類型、細胞供體來 源，培養(yǎng)條件、細胞代次、細胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。