熒光定量 pcr試劑-天根SYBR Green
天根目錄號(hào)：FP205
天根試劑盒-FP205特點(diǎn)
1. SuperReal PreMix Plus采用了的雙組分熱啟動(dòng)DNA聚合酶(化學(xué)修飾的HotStar Taq
DNA聚合酶和抗體修飾的Anti Taq DNA聚合酶)，從而構(gòu)成酶活自動(dòng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)，配合精心
優(yōu)化buffer體系，具有高擴(kuò)增效率，高擴(kuò)增特異性和寬廣的可信范圍的特點(diǎn)。
2. 本產(chǎn)品Buffer體系平衡了K+和NH4+ 的比例，還特別添加了的H-Bond因子, 能協(xié)同調(diào)整
反應(yīng)體系中的氫鍵作用力，使引物模板退火條件更加嚴(yán)謹(jǐn)，反應(yīng)的專一性增強(qiáng)，重復(fù)性
更好。
3. SuperReal PreMix Plus中預(yù)混有SYBR Green I，PCR反應(yīng)液配制時(shí)，只需加入模板、引
物、滅菌蒸餾水便可進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，操作簡(jiǎn)單方便。
4. 本產(chǎn)品附帶ROX Reference Dye，用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)
誤差，方便客戶針對(duì)不同型號(hào)熒光定量PCR儀時(shí)選擇對(duì)應(yīng)濃度使用。
試劑盒原理
本產(chǎn)品采用了雙組分熱啟動(dòng)DNA聚合酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程中
SYBR Green I的熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。
本產(chǎn)品中雙熱啟動(dòng)酶構(gòu)成了的酶活自動(dòng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)。酶活自動(dòng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)是由化學(xué)修飾
的HotStar Taq DNA聚合酶和抗體修飾的Anti Taq DNA聚合酶組成。其中HotStar Taq DNA
聚合酶占絕大部分比例，其聚合酶活性的激活是嚴(yán)格依賴于95℃高溫的一個(gè)緩釋過(guò)程，而
Anti Taq DNA聚合酶則在95℃高溫下激活。經(jīng)過(guò)95℃條件下孵育15 min激活大部分
HotStarTaq DNA聚合酶，進(jìn)入PCR循環(huán)后，每經(jīng)過(guò)一輪95℃條件下變性，即可重新激活一
部分HotStar Taq DNA聚合酶。HotStar Taq DNA聚合酶的酶活緩釋機(jī)制使其可以與Anti
Taq DNA聚合酶構(gòu)成的酶活自動(dòng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)。PCR反應(yīng)初期，激活的Anti Taq DNA聚
合酶可以協(xié)同已經(jīng)激活的HotStar Taq DNA聚合酶達(dá)到優(yōu)化酶活狀態(tài)，而在整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)
程中，每一輪新釋放的HotStart Taq DNA聚合酶活力剛好可以彌補(bǔ)因熱變性所導(dǎo)致的部分酶
活損失。因此，SuperReal PreMix Plus在整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)程始終保持優(yōu)化的DNA聚合酶活
力，配合精心優(yōu)化Buffer體系，從而可以獲得高擴(kuò)增效率，高擴(kuò)增特異性和更加廣泛性的模
板適應(yīng)性。
注意事項(xiàng)
1． PCR反應(yīng)的預(yù)變性條件必須設(shè)定為95℃ 15 min，用以充分激活熱啟動(dòng)酶。
2．本產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照
射。
3．如果試劑沒(méi)有混勻，其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。使用時(shí)請(qǐng)上下顛倒輕輕混勻，請(qǐng)不要使用
振蕩器進(jìn)行混勻，盡量避免出現(xiàn)泡沫，并經(jīng)瞬時(shí)離心后使用。
4．引物純度對(duì)反應(yīng)特異性影響很大，建議使用PAGE級(jí)別以上純化的引物。
5．引物終濃度為0.3 μM可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。如果需要進(jìn)一步優(yōu)化，
可以在 0.2-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
6．20 μl反應(yīng)體系中，基因組DNA或cDNA模板的使用量一般小于100 ng，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為
模板時(shí)，使用量應(yīng)不超過(guò)PCR體系終體積的20%。
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