MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒

 MTT Cell Proliferation Assay 

貨號(hào) 規(guī)格 BDXB0004 100次 

保存：4℃避光保存，保質(zhì)期1年 

 MTT Cell Proliferation Assay 產(chǎn)品概述

    MTT全稱為3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，漢語化學(xué) 名為3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)，是一種黃顏色的染 料。 活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢 （Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的 甲臢，用酶標(biāo)儀在500-600nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成 的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值（OD值）來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞 活性越強(qiáng)（如果是測(cè)藥物毒性，則表示藥物毒性越?。?。

   MTT法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于一些生物 活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等領(lǐng)域，它的特點(diǎn)是敏感度高、成本低廉。它的缺點(diǎn)是需要使用有機(jī)溶劑，不僅是工作量增加， 也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。 

 MTT 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒組成

 1. MTT試劑：10ml 

2. 甲臢溶解液：100ml 

需要自己準(zhǔn)備的材料

 1. PBS（無菌）

 2. 細(xì)胞培養(yǎng)基（無菌）

 3. 96孔板（組織培養(yǎng)級(jí)，平底，無菌） 

4. 倒置顯微鏡 

5. 排槍 

6. 細(xì)胞CO2培養(yǎng)箱 

7. 酶標(biāo)儀（含650、570nm濾光片）

 使用方法 

1. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜〔煌瑪?shù)量的細(xì)胞進(jìn)行96孔板的鋪板（參考值：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入 100μl約2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100μl約5000個(gè)細(xì)胞。如有可能，先做 預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定細(xì)胞鋪板的數(shù)量）。

 2. 待細(xì)胞貼壁、生長(zhǎng)恢復(fù)后，按照實(shí)驗(yàn)需要，給予不同濃度的藥物刺激等處理。

 3. 每孔加入10μl的MTT試劑。（如果細(xì)胞培養(yǎng)基體積大于100μl，按比例調(diào)整加入MTT試 劑的量）

 4. 37℃孵育2-4hr。間或用顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)沉淀形成情況。

 5. 當(dāng)顯微鏡下能看到明顯的紫色結(jié)晶沉淀時(shí)，每孔加入100μl甲臢溶解液（包括對(duì)照孔）。 勿晃動(dòng)。

 6. 室溫（18-24℃）避光放置至少2hr（最長(zhǎng)可以過夜）。如果讀數(shù)偏低，并且紫色結(jié)晶溶 解不，可以繼續(xù)放置。（通常室溫放置就足夠，但37℃有助于加速結(jié)晶的溶解）

 7. 去蓋，將孔板放到酶標(biāo)儀中，在570nm（或介于550-600nm間的任意波長(zhǎng)）測(cè)定OD值， 參比波長(zhǎng)650nm。

 MTT 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒 注意事項(xiàng) 

1. 實(shí)驗(yàn)中必須設(shè)立陰性對(duì)照。 空白孔的OD值應(yīng)該在0±0.1之間 未處理細(xì)胞的OD值通常應(yīng)該在0.75-1.25之間

 2. 陽性對(duì)照也應(yīng)該設(shè)

立。