QuickShuttle-BHK-21 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（BHK-21 細(xì)胞用）

 貨號(hào)：KX0110046  含量：0.8 ml 

用途：用于 BHK-21 細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建（立傳立轉(zhuǎn)）。 

注意事項(xiàng)：

1. 質(zhì)粒 DNA：請(qǐng)用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。 

2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過(guò)濾。 

3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過(guò) DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測(cè)試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。 

4. 以 24 孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為 3~5µl，請(qǐng) 在正式實(shí)驗(yàn)前根據(jù)不同培養(yǎng)基用報(bào)告基因進(jìn)行優(yōu)化。 

5. 立傳立轉(zhuǎn)要求使用生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，即細(xì)胞生長(zhǎng)至 80-90%成片或剛長(zhǎng)滿。若使用生長(zhǎng)過(guò)老的細(xì)胞， 將明顯影響立傳立轉(zhuǎn)的效率。 

6. 立傳立轉(zhuǎn)對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求較高，如果轉(zhuǎn)染效果不理想，可按 QuickShuttle-Enhanced 的轉(zhuǎn)染方法，在細(xì)胞貼壁后進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染操作。 

使用方法 

1. 將新鮮消化的 BHK-21 細(xì)胞接種到 24 孔細(xì)胞板中，每孔 1~2×105細(xì)胞，1ml 培養(yǎng)基。

備注：可在 生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，無(wú)需 18~24 小時(shí)的等候時(shí)間。 

2. 將 2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。

備注：質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的量需要根據(jù)不同培養(yǎng)基來(lái)優(yōu)化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。 

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無(wú)需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時(shí)間。 

4. 將上述復(fù)合物直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，用加樣器吸打混勻。

備注：轉(zhuǎn)染復(fù)合物可直接加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。 

5. 將細(xì)胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

備注：無(wú)需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時(shí)補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng)基。 

6. 24~72 小時(shí)后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析或穩(wěn)定細(xì)胞系加壓篩選。