Screen Quest 發(fā)光法鈣離子檢測試劑盒鈣通量測定法是藥物發(fā)現(xiàn)中篩選G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）的方法。該試劑使用高度鈣敏感和膜通透的腔腸素類似物作為用載脂蛋白基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞的鈣指示劑。水母發(fā)光蛋白是來自維多利亞水母的鈣敏感生物發(fā)光蛋白，已廣泛用作細(xì)胞中的鈣指示劑。當(dāng)與鈣離子結(jié)合時(shí)，水母發(fā)光蛋白復(fù)合物發(fā)出藍(lán)光。發(fā)光強(qiáng)度與Ca ²⁺濃度成正比。我們的腔腸素試劑比熒光鈣測定試劑（如Fluo-4，F(xiàn)luo-3，Calcium-3和Calcium-4）靈敏得多。該試劑提供了一種優(yōu)化的測定方法，用于檢測G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）和鈣通道。該測定可以使用96孔或384孔微孔板進(jìn)行，并易于適應(yīng)自動(dòng)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Screen Quest 發(fā)光法鈣離子檢測試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

通過去除生長培養(yǎng)基制備細(xì)胞
加入腔腸素裝載溶液（對(duì)于96孔板為100 µL /孔，對(duì)于384孔板為25 µL /孔）
在室溫下孵育3-4小時(shí)
檢測水母發(fā)光蛋白的發(fā)光強(qiáng)度

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制

1.腔腸素類似物：將250 µL 100％ETOH（組分B）加到腔腸su類似物（組分A）的小瓶中，并充分混合。注意：25 µL重組腔腸su類似物對(duì)于一塊板就足夠了。如果將試管密封，則未使用的腔腸su類似物原液可在<-20℃下保存一個(gè)月以上。避光并避免重復(fù)的凍融循環(huán)。

2.分析緩沖液（1X）：a）對(duì)于＃36305（10板試劑），準(zhǔn)備使用1X分析緩沖液（組分C）。b）對(duì)于 ＃36306（100板試劑），通過將10 mL的10X分析緩沖液（組分C）稀釋到90 mL的HHBS緩沖液（試劑中未提供）中，制成1X分析緩沖液，并充分混合。注意：10 mL 1X分析緩沖液足以用于一塊板。將未使用的1X分析緩沖液存儲(chǔ)在4℃下。

工作溶液配制

腔腸素裝載溶液：將25 µL ETOH重構(gòu)的腔腸素類似物（儲(chǔ)備溶液制備）添加到10 mL 1X分析緩沖液（儲(chǔ)備溶液制備）中，并充分混合。注意：該工作溶液在室溫下至少可穩(wěn)定2小時(shí)，并避免光照。