小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒檢測原理

將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體，將未結(jié)合的抗體洗凈后再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

▎  重復(fù)性

板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。

▎  批內(nèi)差

取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。

▎  批間差

選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定8次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值

精密度

精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批間差: CV<13%

穩(wěn)定性

經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。

為了幫助您更好地解決在實(shí)驗(yàn)中可能碰到的各種問題，我們設(shè)計了這些問題指導(dǎo)，配以試劑盒內(nèi)的說明書一起供您參考使用。很多因素都將導(dǎo)致免疫測定實(shí)驗(yàn)的失敗，而大多數(shù)技術(shù)失誤是可以通過全面閱讀和準(zhǔn)確理解說明書以及實(shí)驗(yàn)步驟來避免的。若對試劑盒內(nèi)的說明書有任何意見和建議，歡迎反饋。我們期待聽到您的聲音，從而完善我們的產(chǎn)品，更好地為您服務(wù)。
◆ 仔細(xì)閱讀說明書
◆ 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過有效期，請勿使用。
◆ 按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）
◆ 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。
短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存
◆ 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品， （比如移液器，試管，清洗器， 酶標(biāo)儀）
◆ 按說明書將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
◆ 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說明書推薦的條件存儲。
◆ 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測稀釋液，可能在設(shè)計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標(biāo)板之前，必需不停攪拌。
◆ 保證充分的孵育時間和溫度。
◆ 切勿使用不同生產(chǎn)批號的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液時，避免泡沫產(chǎn)生。
◆ 在實(shí)驗(yàn)開始之前，安排好實(shí)驗(yàn)流程。
◆ 在實(shí)驗(yàn)開始之前，清潔工作臺。
◆ 若有問題，應(yīng)與我公司或代理商進(jìn)行溝通。