豬白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒用于定量分析人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和體外細(xì)胞裂解液中IL-1的α含量。預(yù)包被的抗體是IL-1α單克隆抗體。檢測(cè)相抗體也是IL-1α單克隆抗體,將樣品標(biāo)記的抗體依次加入酶標(biāo)板孔中進(jìn)行反應(yīng),然后用PBS或TBS洗滌。然后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);用PBS或TBS*清洗后,用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下變成藍(lán)色,在酸的作用下變成最終的黃色。樣本中的顏色深度與人類IL-1α正相關(guān)。
豬白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒原名淋巴細(xì)胞激活因子(LAF),它激活T細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和分泌IL-2,主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,在炎癥和免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。Interleukin-1α和interleukin-1β結(jié)合相同的細(xì)胞表面受體并引起相同的生物反應(yīng)。本試劑盒以人白介素-1α為標(biāo)準(zhǔn),159個(gè)氨基酸,分子量為18kDa。
豬白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒操作步驟:
1、室溫平衡20分鐘后,從鋁箔袋中取出所需的條帶,剩余的條帶用自封袋密封,放回4℃。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔、樣品孔和空白孔,空白孔不加任何東西;在標(biāo)準(zhǔn)孔μL中加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)50。
3、在待測(cè)樣品孔中加入10個(gè)樣品μ50。加入樣品稀釋液40μL。
4、然后將辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100加入標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔(空白孔不加)μ50。用封板膜密封反應(yīng)孔,在37℃水浴或培養(yǎng)箱中孵育60min。
5、倒掉液體,在吸水紙上拍干,每個(gè)孔注滿洗液,靜置1min,扔掉洗液,在吸水紙上拍干,重復(fù)洗板5次(可以也可以用洗板機(jī)洗板)。
6、將50個(gè)底物A和B加入到所有μ50的孔中。在37℃避光孵育15分鐘。
7、在所有孔μ50中加入終止溶液50。在15min內(nèi)測(cè)量每個(gè)孔在450nm波長(zhǎng)處的OD值。