DuraScribe®T7轉(zhuǎn)錄試劑盒可生成抗RNase A降解的DuraScript®RNA。 這是通過在DuraScribe體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中用2'-氟-dCTP（2'-F-dCTP）和2'-氟-dUTP（2'-F-dUTP）*替換經(jīng)典CTP和UTP來實現(xiàn)的。 該試劑盒采用DuraScribe T7 RNA聚合酶，一種突變型T7 RNA聚合酶，可有效地將2'-F-dCTP和2'-F-dUTP，ATP和GTP整合到RNA中。 DuraScribe T7 RNA聚合酶使用與標(biāo)準(zhǔn)T7 RNA聚合酶相同的轉(zhuǎn)錄啟動子序列。

    DuraScribe®T7轉(zhuǎn)錄試劑盒產(chǎn)生DuraScript®RNA，耐RNase A降解。這是通過將DuraScribe體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的標(biāo)準(zhǔn)CTP和UTP*替換為2 ' -Fluorine-dCTP (2 ' -F-dCTP)和2 ' -Fluorine-dUTP (2 ' -F-dUTP)來完成的。該試劑盒具有DuraScribe T7 RNA聚合酶，一種突變的T7 RNA聚合酶，可以有效地將2 ' -F-dCTP和2 ' -F-dUTP、ATP和GTP整合到RNA中。DuraScribe T7 RNA聚合酶利用與標(biāo)準(zhǔn)T7 RNA聚合酶相同的轉(zhuǎn)錄啟動子序列。

優(yōu)點(diǎn)：

穩(wěn)定：由該試劑盒生產(chǎn)的DuraScript®RNA*耐受RNase A降解；

高產(chǎn)量：根據(jù)轉(zhuǎn)錄本的大小，至少產(chǎn)生110~307 pmol的DuraScript®RNA；

模板靈活：使用標(biāo)準(zhǔn)T7啟動子，接受各種模板DNA，包括線性化載體，PCR產(chǎn)物，cDNA和dsDNA寡核苷酸；

多用途兼容：合成具有RNase A抗性的長或短轉(zhuǎn)錄本，以便用于SELEX篩選核酸適配體或RNA干擾。

組成成分：

? DuraScribe T7 Enzyme Mix (200   U/µL): -20°C

? DuraScribe T7  10X Reaction Buffer：-20°C

? ATP (50 mM): -20°C

? GTP (50 mM)：-20°C

? GTP (50 mM): -20°C

? 2′-F-dCTP (50 mM): -20°C

? 2′-F-dUTP (50 mM): -20°C

? DTT (100 mM): -20°C

? RNase-Free DNase I  (1 U/µL)：-20°C

? Control Template DNA (0.5 µg/µL): -20°C

Lucigen提供的AmpliScribe™T7-Flash™ Transcription Kit使用特殊技術(shù)，用戶在30分鐘內(nèi)即可完成體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得高質(zhì)量RNA。每個標(biāo)準(zhǔn)的AmpliScribe™ T7-Flash™transcription反應(yīng)在30分鐘內(nèi)可從1μg線性化DNA模板中產(chǎn)生160-180μg RNA。該試劑盒可用于生成各種大小的RNA轉(zhuǎn)錄本（從<50bp到>9kb）。另外，Lucigen還提供bition標(biāo)記的轉(zhuǎn)錄試劑盒——AmpliScribe™T7-Flash™ Biotin-RNA Transcription Kit，能將bition-16-UTP整合到RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中。

參考文獻(xiàn)：

1. Molecular   Cloning - A Laboratory Manual, Third Edition, 2001. CSHL Press. pp 7.27 – 7.34.  J. Sambrook and D.   Russell.

2. MEGAscript™ T7 試劑盒是一種超高得率體外轉(zhuǎn)錄試劑盒。通過改變典型的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件，可以有效利用的核苷酸濃度，從而獲得較高的得率。T7 酶混合物和 10X 反應(yīng)緩沖液針對每個批次和 RNA 聚合酶進(jìn)行了專門校準(zhǔn)。
   
   使用 MEGAscript™ T7 試劑盒
   MEGAscript™ T7 試劑盒包含體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)成分及對照模板。該試劑盒將從隨試劑盒提供的對照模板中產(chǎn)生總計 3–5 mg RNA（約 100 µg RNA 或更多/反應(yīng)）。這相當(dāng)于每摩爾模板產(chǎn)生 400–650 摩爾 RNA。較小的模板通常產(chǎn)生較低質(zhì)量和較高摩爾得率的產(chǎn)物。新型轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件和的高得率技術(shù)使得 RNA 合成量可達(dá)常規(guī)轉(zhuǎn)錄反應(yīng)生成的 RNA 量的 10–50 倍。
   
   應(yīng)用
   MEGAscript™ T7 試劑盒用于合成大量未標(biāo)記或低比活度 RNA，以用于多種用途、包括體外翻譯、反義/顯微注射研究以及 RNA 結(jié)合蛋白的分離。在大規(guī)模轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中，所有 4 個核苷酸的濃度都很高，遠(yuǎn)高于酶的 Km。MEGAscript™ T7 試劑盒的 RNA 得率通常比傳統(tǒng)體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)高出 10 倍以上。不建議將該試劑盒用于合成高比活度探針。
   

產(chǎn)品信息