聚zuansuan是摻入重組蛋白中zui流行的親和標(biāo)簽之一。它可以插入N端或C端，并在多種宿主中表達(dá)。由于其體積小，聚zuansuan標(biāo)簽可作為蛋白質(zhì)純化和檢測(cè)的理想工具。HIS Lite™Cy3 Bis NTA-Ni和Cy5 Bis NTA-Ni復(fù)合物可對(duì)His標(biāo)記的融合蛋白進(jìn)行特異性和高度靈敏的檢測(cè)。Ni-NTA配合物zui早由Kapanidis等報(bào)道。對(duì)具有zui小交叉反應(yīng)性的多zuansuan標(biāo)簽具有特異性。Cy3和Cy5染料在通常可用的波長(zhǎng)處顯示強(qiáng)熒光信號(hào)，幾乎沒(méi)有猝滅。Cy3 Bis NTA-Ni和Cy5 Bis NTA-Ni復(fù)合物可直接應(yīng)用于SDS-PAGE凝膠或Western blot膜進(jìn)行熒光成像。使用Cy3 Bis NTA-Ni和Cy5 Bis NTA-Ni復(fù)合物進(jìn)行檢測(cè)所需的孵育時(shí)間少于蛋白質(zhì)-抗體結(jié)合所需的孵育時(shí)間。由于Ni-NTA絡(luò)合物直接與熒光團(tuán)偶聯(lián)，因此不需要二次反應(yīng)。

普通儲(chǔ)備溶液的制備

表1.將HIS Lite™Cy3 Bis NTA-Ni復(fù)合物的特定質(zhì)量重構(gòu)至給定濃度所需的水量。請(qǐng)注意，該體積僅用于制備儲(chǔ)備溶液。有關(guān)適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)/生理緩沖液，請(qǐng)參閱樣本實(shí)驗(yàn)方案。