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常見的報道基因包括β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸苷酶和螢光素酶。螢光素酶測定法的優(yōu)點是靈敏度高，在大多數(shù)細胞類型中不存在螢光素酶活性，動態(tài)范圍寬，快速且成本低。通用和常見的報告基因是北美螢火蟲Photinus pyralis的熒光素酶。該蛋白不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度（體內(nèi)）甚至沒有毒性，可用于原核和真核細胞。螢火蟲螢光素酶在ATP，鎂和氧的存在下催化螢光素的生物發(fā)光氧化。該Amplite™螢光素酶報告基因測定試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量活細胞和細胞提取物中的螢光素酶活性。我們的配方產(chǎn)生的發(fā)光產(chǎn)物在與螢光素酶相互作用后可提供強力發(fā)光。該套件通過我們優(yōu)化的“混合和讀取"測定規(guī)程提供了所有*的成分，與HTS液體處理儀器兼容。它具有*的靈敏度，可用于需要苛刻靈敏度的測定中。
| 發(fā)光酶標(biāo)儀 | |
| 推薦板 | 純白色 |
| 組件A：螢光素酶傳感器（光敏） | 1瓶 |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
用測試化合物準(zhǔn)備細胞（樣品）（對于96孔板為100 µL /孔，對于384孔板為25 µL /孔）
添加等量的螢光素酶傳感器工作溶液
在室溫下孵育10-20分鐘
監(jiān)控560 nm處的發(fā)光強度
重要說明
使用前，將所有套件組件解凍至室溫。對于所有發(fā)光實驗，建議使用白板以獲得*結(jié)果。
準(zhǔn)備工作溶液
1.對于目錄號12518，將反應(yīng)緩沖液（組分B）的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到熒光素酶傳感器（組分A）的瓶子中，并充分混合以制成熒光素酶傳感器的工作溶液。
2.對于Cat。＃12519，將10 mL反應(yīng)緩沖液（組分B）加入，對于Cat。＃12520，將100 mL反應(yīng)緩沖液（組分B）加入熒光素酶傳感器（組分A）瓶中并充分混合。然后，將得到的溶液轉(zhuǎn)移回瓶反應(yīng)緩沖液（組分B）中。要*轉(zhuǎn)移內(nèi)容物，必須進行多次清洗。 注意： 重構(gòu)的熒光素酶傳感器工作溶液不穩(wěn)定。避光。
程序
運行螢光素酶測定：
通過在所需化合物緩沖液中加入10 µL 10X測試化合物（96孔板）或5 µL 5X測試化合物（384孔板）來用測試化合物處理細胞（或樣品）。對于空白孔（沒有細胞的培養(yǎng)基），添加相應(yīng)量的化合物緩沖液。
將細胞板在5％CO 2培養(yǎng)箱中于37°C孵育所需的時間，通常為4小時至過夜。
每孔熒光素酶傳感器工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。
在室溫下孵育平板10-20分鐘。遠離光線。
用發(fā)光計監(jiān)控發(fā)光強度。
建立標(biāo)準(zhǔn)的螢光素酶校準(zhǔn)曲線： 注意：如果需要計算樣品中螢光素酶的量，則應(yīng)與上述測定法一起生成螢光素酶標(biāo)準(zhǔn)曲線。
通過包含不含熒光素酶的樣品（作為對照）測量背景發(fā)光，在含0.1％BSA的PBS緩沖液中進行一系列熒光素酶稀釋液。注意：通常螢光素酶的濃度從1 pg / mL到1 ng / mL是合適的。
將100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀釋的熒光素酶溶液添加到一個空板中。
加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的熒光素酶工作溶液。
在避光的條件下，將反應(yīng)混合物在室溫下孵育10-20分鐘。
用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)光計記錄發(fā)光強度。
生成熒光素酶標(biāo)準(zhǔn)曲線。
12518 Amplite™熒光素酶報告基因檢測試劑盒 Amplite™ Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 1 plate 12519 Amplite™熒光素酶報告基因檢測試劑盒 Amplite™ Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 10 plates 12520 Amplite™熒光素酶報告基因檢測試劑盒 Amplite™ Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 100 plates 12530 Amplite™高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒 Amplite™ Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 1 plate 12531 Amplite™高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒 Amplite™ Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 10 Plates 12532 Amplite™高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒 Amplite™ Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 100 plates 12535 Amplite™海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒 Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 1 plate 12536 Amplite™海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒 Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 10 plates
