5
辣根過氧化物酶（HRP）是一個小分子（MW?40 KD），廣泛用于各種生物檢測中。HRP偶聯(lián)物被廣泛用作ELISA，免疫組織化學技術，Northern，Southern和Western印跡分析的輔助檢測試劑。由于其體積小，它很少會引起抗體/抗原復合物形成的位阻問題。通常以4：1的比例與抗體偶聯(lián)。另外，與其他標記酶相比，HRP價格便宜。與過氧化物酶有關的主要缺點是它們對許多防腐劑的耐受性低，即使在低濃度下也能使過氧化物酶的活性失活。我們的Amplite™熒光ELISA分析試劑盒包含所有必需成分，包括用于ELISA檢測的熒光Amplite™Red HRP底物。該試劑盒提供了與HTS液體處理兼容的優(yōu)
| 熒光酶標儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組分A：Amplite™紅色過氧化物酶底物 | 2個小瓶 |
| 成分B：H2O2 | 1小瓶（3％穩(wěn)定溶液，500 µL） |
| 組分C：測定緩沖液 | 1瓶（100毫升） |
| 成分D：DMSO | 1小瓶（1毫升） |
| 成分E：山羊抗小鼠IgG-HRP綴合物 | 1小瓶（25 µL） |
準備ELISA板
準備過氧化物酶工作溶液
將100 µL /孔的過氧化物酶工作溶液加入ELISA板
在室溫下孵育15-60分鐘
監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm的熒光強度
重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。
1. Amplite™紅色過氧化物酶底物原液（200X）：
將250 µL DMSO（組分D）添加到Amplite™紅色過氧化物酶底物（組分A）的小瓶中。注意：50 µL的Amplite™Red過氧化物酶底物原液足以容納1個板。
2. H 2 O 2儲備溶液（20 mM）：
將22.7 µL的3％H 2 O 2（0.88 M，組分B）添加到977 µL的測定緩沖液（組分C）中。注意：稀釋的H 2 O 2儲備溶液不穩(wěn)定。未使用的部分應丟棄。
配制標準溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
小鼠IgG（不包括在內）可用于生成標準曲線。用3 µg / mL的初始濃度和1：3的稀釋倍數(shù)，用0.2 Mtansuanqingna緩沖液（pH 9.4）將總小鼠IgG稀釋到微孔板中。
準備工作溶液
1.山羊抗小鼠IgG-HRP結合物工作溶液：
將2 µL山羊抗小鼠IgG-HRP結合物（組分E）添加到10 mL含1％BSA的PBS中（PBS-BSA，不包括在內）。注意： 10 mL山羊抗小鼠IgG-HRP偶聯(lián)物工作液足以用于1個板。建議將此山羊抗小鼠IgG-HRP偶聯(lián)物工作溶液的濃度作為嘗試的初始濃度。每個具體應用的*濃度應根據(jù)經(jīng)驗確定。
2.過氧化物酶工作溶液：在9.85 mL的測定緩沖液（組分C）中
加入50μLAmplite™紅色過氧化物酶底物儲備溶液（200X）和100μLH 2 O 2儲備溶液（20 mM）。 10 mL過氧化物酶工作溶液。遠離光線。
程序
準備ELISA板：
執(zhí)行所有必要的ELISA制備步驟。
用含有0.02％至0.05％吐溫的PBS洗滌ELISA孔三次® 20（PBS-Tween中）和漏區(qū)。
在每個孔中加入100 µL準備好的山羊抗小鼠IgG-HRP結合物工作溶液。
在室溫下孵育30分鐘。排出HRP共軛物。
用PBS-Tween洗滌孔3次并瀝干。
在ELISA板中運行過氧化物酶測定：
將100 µL過氧化物酶工作溶液加到每個裝有樣品和對照的排水微孔板孔中。
在避光的條件下，將反應在室溫下孵育30分鐘或更長時間。
使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)530-570 nm（*540 nm）和發(fā)射590-600 nm處監(jiān)控熒光的增加。注意：該板也可以通過吸光度酶標儀在576±5 nm的波長下讀取。但是，與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測的靈敏度較低。
11540 Amplite™熒光法羊抗鼠IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Goat Anti-Mouse IgG-HRP Conjugate ELISA Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11541 Amplite™熒光法羊抗兔IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Conjugate ELISA Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11551 Amplite™比色法過氧化酶檢測試劑盒 *藍色* Amplite™ Colorimetric Peroxidase Assay Kit *Blue Color* 1 kit 11552 Amplite™熒光法過氧化酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Peroxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11553 Amplite™熒光法過氧化酶檢測試劑盒 *近紅外熒光* Amplite™ Fluorimetric Peroxidase Assay Kit *Near Infrared Fluorescence* 1 kit 11559 Amplite™發(fā)光法過氧化酶檢測試劑盒 Amplite™ Luminometric Peroxidase Assay Kit 1 kit
