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上海通蔚生物有限公司
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產(chǎn)品型號
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所 在 地上海市
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更新時間：2019-01-10 16:58:09瀏覽次數(shù)：697次
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SDS裂解液產(chǎn)品簡介：
多種成分均可以從細胞中提取總蛋白，例如Triton、SDS、NP-40等。SDS裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一種極其強烈的細胞組織快速裂解液并獲得總蛋白質(zhì)。其裂解液強度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA裂解液(中)、通用細胞裂解液、Western及IP細胞裂解液，所獲得的蛋白質(zhì)可以用于Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等。
SDS Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、SDS等組成，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細胞
取SDS Lysis Buffe室溫溶解混勻，使用前取適量裂解液加入PMSF，使終濃度為1mM。
去除貼壁細胞的培養(yǎng)液，用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心，棄上清，留取沉淀。
按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入SDS Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液作用于細胞1～3s內(nèi)，細胞就會被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應置于冰上或4℃裂解15～30min。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200～250μl。
10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細胞
取SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后，使用前取適量裂解液加入PMSF，使其終濃度為1mM。
低速離心懸浮細胞，棄上清，收集沉淀。
用手指輕彈細胞，使其松散。按照6孔板每孔細胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞，充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。通常裂解液作用于細胞1～3s內(nèi)，細胞就會被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 置于冰上或4℃裂解15～30min。
10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(三)組織樣本
取SDS Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，使用前取適量裂解液加入PMSF，使其終濃度為1mM。
把*切成細小的碎片，越小越好。
取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
按20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min。如果是所提蛋白樣品用于CHIP,置于冰上或4℃繼續(xù)裂解10～20min。
步驟3、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的SDS Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，過程盡量控制在1～2min之內(nèi)， 以減少蛋白的降解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應置于冰上或4℃繼續(xù)裂解10～20min。
10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
SDS裂解液
注意事項：
去除貼壁細胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。
如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。
在培養(yǎng)細胞的裂解中，如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/離心管，然后再裂解。少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
溶解SDS Lysis Buffer時，應盡量縮短溶解時間，避免裂解液中的有效成分失效。
細胞裂解的操作步驟，應置于冰上或4℃進行。
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