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柱式動物線粒體DNAout

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更新時間：2018-06-11 14:45:53瀏覽次數(shù)：343次

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克隆及表達產(chǎn)品

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產(chǎn)品簡介

柱式動物線粒體DNAout，測序級線粒體是非常重要的細胞器，它不但跟很多人類疾病相關(guān)，而且還是母系遺傳
研究的重要材料。對線粒體進行遺傳研究和進化研究都需要純化線粒體DNA。本產(chǎn)品
就是基于先純化動物細胞線粒體、再從中柱式法純化其DNA的兩步法試劑盒。它具有
下列特點：
1. 即開即用，用戶不需要自己配制各種溶液，優(yōu)化各種條件。

詳細介紹

柱式動物線粒體DNAout，測序級

名稱	規(guī)格	價格	手冊
柱式動物線粒體DNAout，測序級	15次	1990元

線粒體是非常重要的細胞器，它不但跟很多人類疾病相關(guān)，而且還是母系遺傳
研究的重要材料。對線粒體進行遺傳研究和進化研究都需要純化線粒體DNA。本產(chǎn)品
就是基于先純化動物細胞線粒體、再從中柱式法純化其DNA的兩步法試劑盒。它具有
下列特點：
1. 即開即用，用戶不需要自己配制各種溶液，優(yōu)化各種條件。
2. 兩步法，先純化線粒體，再柱式法純化其中的DNA，有粗提（mtDNA純化前不用DNase處理線粒體）和精提（mtDNA純化前用DNase處理線粒體）兩套操作方案，適合于各種要求不同的后續(xù)實驗。
3. 本產(chǎn)品一，測序級次可以處理約107×108個培養(yǎng)細胞，10 mg培養(yǎng)細胞（相當(dāng)于5瓶150 mm培養(yǎng)細胞）可以純化到到0.2-0.5 mg線粒體。
4. 本產(chǎn)品適用于各種懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)動物細胞，不建議用于動物實體組織。
5. 提供線粒體染液，可以在操作中隨時監(jiān)測純化過程中線粒體的完整性。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，，測序級離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
，測序級相關(guān)產(chǎn)品列表：
Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (reducing,6X)
Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (non reducing,4X)
Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (reducing,4X)
LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X)
LDS-Sample Buffer (reducing,4X)
Leucine Solution（亮氨酸溶液）,0.3%