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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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所 在 地上海市
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更新時間：2018-05-18 11:10:23瀏覽次數(shù)：254次
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Mouse TNFα ELISA Kit
規(guī)格： 96T
檢測范圍：15.6pg/ml→1000pg/ml （細胞培養(yǎng)上清、細胞裂解液）；
7.8pg/ml→500pg/ml（小鼠血清、血漿等）。
敏感性： ＜1pg/ml
特異性： 系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月（4℃）；12 個月（-20℃）。
用途： 用于體外定
Mouse TNFα ELISA Kit
規(guī)格： 96T
檢測范圍：15.6pg/ml→1000pg/ml (細胞培養(yǎng)上清、細胞裂解液)；
7.8pg/ml→500pg/ml(小鼠血清、血漿等)。
敏感性： ＜1pg/ml
特異性： 系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月(4℃)；12 個月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析小鼠血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清。
Mouse TNFα ELISA Kit工作原理
Tumor necrosis factor α，TNFα，腫瘤壞死因子α。TNFα前體是以跨膜蛋白的形式存在于細胞
內(nèi)，在細胞外被剪切成 17KDa 的成熟形態(tài)（157 個氨基酸）。活性的 TNFα以非共價鍵二聚體、
三聚體甚至五聚體的形式存在，但在 SDS-PAGE 顯示為單一 17KDa 條帶。很多細胞都能合成 TNF
α，包括各種免疫細胞（單核細胞、巨噬細胞、T、B 細胞、粒細胞、NK 細胞）和非免疫細胞
（上皮細胞、纖維細胞、肌細胞、Kuppfer 細胞等）。TNFα的合成受到很多因素的影響。其生理
功能zui早認為是有抗腫瘤活性，現(xiàn)在已明確不僅能調(diào)節(jié)腫瘤細胞的生長，對很多細胞的生長、分
化和代謝都有影響。TNFα是免疫宿主反應(yīng)的快速反應(yīng)因子。其另一特點是在免疫疾病中理
性作用。
所提供的 TNFα ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（EnzymeLinked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預先包被的抗體為單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后，PBS 或 TBS 洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 TNFα呈正相關(guān)。
內(nèi)容 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
預包被抗 TNFα抗體的 96 孔板 | 96T | 1 |
凍干標準品 | 10ng/管 | 2 |
生物素標記 | 130ul | 1 |
親和素-過氧化物酶復合物 | 130ul | 1 |
樣品稀釋液 | 30ml | 1 |
抗體稀釋液 | 12ml | 1 |
ABC 稀釋液 | 12ml | 1 |
TMB 顯色液 | 10ml | 1 |
TMB 終止液 | 10ml | 1 |
洗滌緩沖液(25X) | 20ml | 1 |
封板膜 |
| 2 |
說明書 |
| 1 |
Mouse TNFα ELISA Kit需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規(guī)格酶標儀。
2. 自動洗板機。
3. 恒溫箱
4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器。
5. 干凈的試管和 Eppendof 管。
6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍，成 1X 洗滌緩沖液。
注意事項
1． 使用前 TMB 顯色液應(yīng)為無色透明溶液，若發(fā)現(xiàn)顏色異常，請及時與廠家。
2． 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
3 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。
4． 為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。
5． 禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。
6. 本公司提供的 96 孔酶標板是單條可拆型酶標板，用戶可按需求使用；剩余的酶標板請
按保存條件貯存。
7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應(yīng)避免用力過大導致液體濺出。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi)，浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
樣品的準備和保存
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復凍融。
細胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細胞裂解液——對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常 10 秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
樣品稀釋的一般原則
用戶須估計樣品待測因子的含量，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的
Mouse TNFα ELISA Kit稀釋方案：
高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。
中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。
低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。
特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。
操作程序總結(jié)：
1． 加樣品和標準品，37℃反應(yīng) 90 分鐘。不洗。
2． 加生物素標記抗體，37℃反應(yīng) 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。
3． 加 ABC，37℃反應(yīng) 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。
4． TMB37℃反應(yīng) 15-20 分鐘。
5． 加入 TMB 終止液，讀數(shù)。
牛 免疫球蛋白G IgG Immunoglobulin G
牛 免疫球蛋白M IgM Immunoglobulin M
牛 內(nèi)毒素 ET endotoxin
牛 內(nèi)皮素1 ET-1 Endothelin 1
牛 內(nèi)皮型一氧化氮合酶 eNOS Endothelial nitric oxide synthase
牛 內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素 GC glucocorticoid
牛 鳥氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶 OTC ornithine transcarbamylase
牛 鳥氨酸脫羧酶 ODC Ornithine decarboxylase
牛 鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶 OAT Ornithine aminotransferase
牛 尿囊素 allantoin allantoin
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