背景介紹:CD14 is a single copy gene encoding 2 protein forms: a 50 to 55 kDa glycosylphosphatidylinositol anchored membrane protein (mCD14) and a monocyte or liver derived soluble serum protein (sCD14) that lacks the anchor. Both molecules are critical for lipopolysaccharide (LPS) dependent signal transduction, and sCD14 confers LPS sensitivity to cells lacking mCD14. Increased sCD14 levels are associated with inflammatory infectious diseases and high mortality in gram negative shock. CD14 also appears to be involved in clearance of gram-negative bacteria via its high affinity binding to LPS-LPB complexes.
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中文名稱:內(nèi)毒素受體抗體
英文名稱:Anti-CD14 antibody
規(guī)格:0.1ml/0.2m
濃度:1mg/1ml
抗體來源:本公司抗體有兔來源和鼠來源等
克隆類型:兔來源為多抗,鼠來源為單抗
產(chǎn)品類型:一抗
內(nèi)毒素受體抗體,Anti-CD14抗體簡單介紹:
別 名:CD14 antigen; CD14 molecule; Lipopolysaccharide receptor; LPSR; Monocyte Differentiation Antigen 14; Monocyte differentiation antigen CD14; Myeloid cell specific leucine rich glycoprotein; CD14_MOUSE; Myeloid cell-specific leucine-rich glycoprotein.
合適的抗體稀釋度
抗體的濃度是免疫染色的關(guān)鍵,如果抗體濃度過高,抗體分子過多于抗原決定簇,可導(dǎo)致抗體結(jié)合減少,產(chǎn)生陰性結(jié)果。此陰性結(jié)果并不一定是缺少抗原,而是由于抗體過量,這種現(xiàn)象類似于凝集反應(yīng)中的前帶效應(yīng)(prozone effect)。因此,必須使用一系列稀釋做“棋盤式效價滴定”,檢測抗體的合適稀釋度,以得到zui大強度的特異性染色和zui弱的背景染色??贵w稀釋度應(yīng)根據(jù):1.抗體效價高,溶液中特異性抗體濃度越高,工作稀釋度越高;2.一般講,應(yīng)用的抗體稀釋度越大,溫育時間越長;3.對于抗體與非特異性蛋白的結(jié)合,只有高稀釋度時才能防止其非特異性背景染色;4.稀釋用緩沖液的種類,標(biāo)本的固定和處理過程等也可影響稀釋度,所以合適的稀釋度應(yīng)根據(jù)具體情況測定??贵w的稀釋主要是指*抗體,因為*抗體中特異性抗體合適的濃度是關(guān)鍵,應(yīng)用高稀釋度*抗體僅高親和力的特異性染色反應(yīng),減少或消除其中交叉抗體反應(yīng)。
免疫印跡法是一種通過凝膠電泳分離蛋白質(zhì)并通過電轉(zhuǎn)移把蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到吸附膜上。一經(jīng)蛋白印跡后,即可通過特異性的標(biāo)記抗體檢測到相應(yīng)蛋白質(zhì)。
十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)可用于檢測已被SDS化學(xué)變性的蛋白。然而,某些特定的抗體不會在一個變性的蛋白質(zhì)分子上識別其抗原表位,這時需要進(jìn)行不含SDS的聚丙烯酰胺凝膠電泳。
蛋白印跡轉(zhuǎn)膜可以通過濕法或半干法進(jìn)行。在前者,凝膠夾在印跡膜和各種過濾裝置中間,然后把整個裝置埋進(jìn)一個裝滿Tris轉(zhuǎn)移緩沖的電極槽中。在后者,夾在中間的凝膠周圍只有少量的緩沖液,然后封閉在電極板之間。雖然半干法轉(zhuǎn)膜較快,但需要很好地擬合各部分的夾層配件,而濕法轉(zhuǎn)膜很少會出現(xiàn)問題,可以盡量保持重復(fù)實驗結(jié)果的*性。此外,如果半干法轉(zhuǎn)膜時間過長,較小分子量的蛋白質(zhì)可能會從膜上轉(zhuǎn)過。
轉(zhuǎn)膜后,需對膜進(jìn)行封閉,以減少非特異性蛋白結(jié)合,然后進(jìn)行用一抗孵育膜,以研究感興趣的目標(biāo)蛋白。單克隆抗體通常具有更高的特異性;然而許多單克隆抗體產(chǎn)生于某個特定肽段而不是一個天然蛋白質(zhì),因此可能無法檢測到PAGE所分離的天然蛋白。也可使用多克隆抗體,但易形成較高的背景值。因一抗通常無標(biāo)記,所以需要一個可以結(jié)合在一抗Fc段的標(biāo)記的二抗,以用于zui后的檢測。通常會用酶來標(biāo)記二抗。酶標(biāo)記后的印跡可通過化學(xué)發(fā)光酶底物及放射自顯影技術(shù)成像。被抗體檢測和標(biāo)記到的蛋白質(zhì)會出現(xiàn)在圖像的暗區(qū)。
斑點印跡法類似于免疫印跡法,在膜上檢測目標(biāo)蛋白;但是斑點印跡法中檢測的蛋白質(zhì)不用電泳進(jìn)行分離。取而代之的是,含有目標(biāo)蛋白的樣品被直接“點”到膜上,這不能做到定量檢測,但它可以直接檢測某種特定蛋白的有無。例如,斑點印跡法可用于檢測蔗糖梯度分離的細(xì)胞裂解產(chǎn)物中的某些蛋白質(zhì)定位。
內(nèi)毒素受體抗體保存條件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
避免反復(fù)凍融,保質(zhì)期一年。
免疫熒光雙重染色熒光雙染或多重染色是指將帶有不同熒光素標(biāo)記的抗體孵育在同一張切片上,鏡下觀察時將不同的顏色組合在一起,將不同的抗原表達(dá)情況一起呈現(xiàn)出來,這樣分析多個抗原的關(guān)聯(lián)性更客觀、更直接。
熒光雙染也有直接法和間接法。直接法是使用帶有不同熒光素標(biāo)記的兩個抗體同時孵育后觀測;間接法需要用到兩個不同種屬來源的一抗(例如一個鼠源抗體,一個兔源抗體),后面要選擇與一抗相對應(yīng)的二抗同時需要帶有不同的熒光素標(biāo)記(例如FITC標(biāo)記山羊抗小鼠和Cy3標(biāo)記山羊抗兔),間接法需要同時兼顧一抗和二抗的種屬關(guān)系,避免出現(xiàn)相互的交叉反應(yīng)。
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