背景介紹:Cell surface heparan sulfate proteoglycans are composed of a membrane-associated protein core substituted with a variable number of heparan sulfate chains. Members of the glypican-related integral membrane proteoglycan family (GRIPS) contain a core protein anchored to the cytoplasmic membrane via a glycosyl phosphatidylinositol linkage. These proteins may play a role in the control of cell division and growth regulation. The protein encoded by this gene can bind to and inhibit the dipeptidyl peptidase activity of CD26, and it can induce apoptosis in certain cell types. Deletion mutations in this gene are associated with Simpson-Golabi-Behmel syndrome, also known as Simpson dysmorphia syndrome. Alternative splicing results in multiple transcript variants.
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磷脂?;嫉鞍拙厶?抗體,Anti-glypican 3抗體-上海研盟生物有限公司優(yōu)質(zhì)*產(chǎn)品。我公司銷售國(guó)內(nèi)外科研產(chǎn)品,如生物試劑、生化試劑,一抗二抗,各種標(biāo)記抗體,Elisa酶聯(lián)免疫試劑盒,放免試劑盒,培養(yǎng)基,各種動(dòng)物血清等產(chǎn)品,歡迎廣大新老客戶前來(lái)咨詢訂購(gòu)。
中文名稱:磷脂酰基醇蛋白聚糖3抗體
英文名稱:Anti-glypican 3 antibody
規(guī)格:0.1ml/0.2m
濃度:1mg/1ml
抗體來(lái)源:本公司抗體有兔來(lái)源和鼠來(lái)源等
克隆類型:兔來(lái)源為多抗,鼠來(lái)源為單抗
產(chǎn)品類型:一抗
磷脂?;嫉鞍拙厶?抗體,Anti-glypican 3抗體簡(jiǎn)單介紹:
別 名:glypican 3; glypican3; glypican-3; GPC3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7.Intestinal protein OCI-5.
此產(chǎn)品本公司有標(biāo)記的一抗出售,相關(guān)標(biāo)記有:Alexa Fluor 350 標(biāo)記、Alexa Fluor 488 標(biāo)記、Alexa Fluor 555 標(biāo)記、Alexa Fluor 647 標(biāo)記、AP標(biāo)記、APC標(biāo)記、Biotin標(biāo)記、Cy3標(biāo)記、Cy5標(biāo)記、Cy5.5標(biāo)記、Cy7標(biāo)記、FITC標(biāo)記、Gold標(biāo)記、HRP標(biāo)記、PE標(biāo)記、PE-Cy3標(biāo)記、PE-CY5標(biāo)記、PE-CY5.5標(biāo)記、PE-CY7標(biāo)記、RBITC標(biāo)記
Western,也稱Western blot、Western blotting、Western 印跡,是用抗體檢測(cè)蛋白的重要方法之一。
WB實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、 把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上;
a. 轉(zhuǎn)移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜,將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上,用5ml移液管在凝膠上來(lái)回滾動(dòng)去除所有的氣泡
b. 在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙(預(yù)先用轉(zhuǎn)移緩沖液浸濕),將凝膠夾在中間,保持濕潤(rùn)和沒(méi)有氣泡
c. 將此濾紙/凝膠/薄膜濾紙按照廠家建議方法放入電泳裝置中,凝膠面向陰極
d. 將上述裝置放入緩沖液槽中,并灌滿轉(zhuǎn)移緩沖液以淹沒(méi)凝膠
e. 按照廠家所示接通電源開始電泳轉(zhuǎn)移
f. 轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出薄膜和凝膠,棄去凝膠
2、 將薄膜漂在氨基黑中快速染色,直至分子量標(biāo)準(zhǔn)顯現(xiàn)時(shí)取出,記錄下標(biāo)準(zhǔn)位置;
3、 用100ml水洗滌纖維素膜,必要時(shí)可用脫色緩沖液;
4、 膜置印跡緩沖液中于37℃保溫1小時(shí);
5、 室溫下,用PBS-Tween緩沖液洗滌薄膜
6、 用封口機(jī)將薄膜封入塑料袋中,盡可能不留空氣;
7、 袋的一角剪一緩沖液的小口,用透析袋夾緊;
8、 混合:NGS(100微升),印跡緩沖液中的抗體(2.5-5毫升),加在裝薄膜的袋中,于室溫下?lián)u動(dòng)2小時(shí)(或4℃過(guò)夜);
9、 用總體積300ml PBS-Tween緩沖液,分4次在一淺盤中洗滌薄膜,每次75ml;
10、將連接*的羊抗兔IgG(40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS)加在袋內(nèi),于室溫下?lián)u動(dòng)1小時(shí);
11、按步驟9洗滌;
12、加入抗生素蛋白-HRP(40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS),于室溫下?lián)u動(dòng);
13、Western Blot中轉(zhuǎn)移在膜上的蛋白處于變性狀態(tài),空間結(jié)構(gòu)改變,因此那些識(shí)別空間表位的抗體不能用于Western Blot檢測(cè)。這種情況可以將表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞或細(xì)胞裂解液中的所有蛋白物素化,再用酶標(biāo)記親和素進(jìn)行Western Blot。實(shí)驗(yàn)中取膠和膜需帶手套。
磷脂?;嫉鞍拙厶?抗體保存條件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
避免反復(fù)凍融,保質(zhì)期一年。
免疫組化問(wèn)題解答
1、染色弱?
原因:抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短
解決方法:提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少于60分鐘
原因:試劑超過(guò)有效使用時(shí)間
解決方法:應(yīng)更換試劑
原因:操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干
解決方法:每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液 使試劑稀釋 (應(yīng)防止切片干燥)
原因:室溫太低,低于15度
解決方法:要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過(guò)夜
原因:蛋白封閉過(guò)度
解決方法:封閉不要超過(guò)12分鐘
染色陰性?
原因:操作步驟錯(cuò)誤
解決方法:應(yīng)重試,設(shè)陽(yáng)性對(duì)照
原因:組織中無(wú)抗原
解決方法:設(shè)陽(yáng)性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
原因:一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤
解決方法:仔細(xì)確定一抗二抗種屬無(wú)誤
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