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牛血清白蛋白(BSA),是牛血清中的一種球蛋白,包含583個(gè)氨基酸殘基,分子量為66.430 kDa,等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,例如在western blot中作為Blocking agent。
BSA一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中,因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入BSA后,它可能起到“保護(hù)”或“載體”作用,不少酶類添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會(huì)受到什么影響。對(duì)多數(shù)底物DNA而言,BSA可以使酶切更*,并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃,酶切反應(yīng)超過1h時(shí),BSA可以使酶更加穩(wěn)定,因?yàn)樵诓缓?/span>BSA的反應(yīng)緩沖液中,許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時(shí)間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內(nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學(xué)物質(zhì)。
BSA在內(nèi)切酶的緩沖液的作用:
1.BSA是酶的穩(wěn)定劑,防止酶的分解和非特異性吸附;
2.BSA能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱,表面張力及化學(xué)因素引起的變性的至于作用機(jī)理我不是很清楚,可能是因?yàn)樗Y(jié)構(gòu)中有17個(gè)二硫鍵,和一個(gè)巰基,巰基的化學(xué)反應(yīng)很活潑,二硫鍵有抗氧化還原的作用,因此可與多種陽(yáng)離子,陰離子和小分子結(jié)合;
3.BSA能防止酶吸附到管壁而損失。
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