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羥基磷灰石填料——純化蛋白、多肽、核酸
分離機理:羥基磷灰石具有*的分離機理,是*直接用于蛋白質(zhì)和核酸純化的無機層析填料,高度耐堿,生物安全性zui高。其中磷酸離子與帶正電的蛋白質(zhì)以離子鍵結(jié)合,具有離子交換特性,可由NaCl濃度梯度或磷酸鈉濃度梯度洗脫,其中的Ca2+離子與帶負電蛋白質(zhì)的自由羧基以金屬螯合方式結(jié)合,該結(jié)合方式對NaCl不敏感,可由磷酸鈉濃度梯度洗脫。因此該填料既可以用磷酸鈉單梯度洗脫,也可以采用NaCl梯度洗脫后以低濃度磷酸鈉緩沖液平衡,再以磷酸鈉濃度梯度洗脫的雙梯度洗脫模型,以達到更高的分辨率。
羥基磷灰石類型選擇:羥基磷灰石因陶瓷化工藝不同分為2種類型:I型和II型,I型對蛋白質(zhì)具有更大的保留,對普通蛋白質(zhì)具有更大的動態(tài)載量,主要純化大部分蛋白質(zhì)(分子量一般在100kd一下);II型由于孔徑較I型大,因而對抗體和部分重組疫苗等大分子量蛋白質(zhì)的動態(tài)載量更高,而對HSA幾乎無保留,因而更適合于抗體的純化,同時II型對核酸具有更大的保留,能夠分辯單、雙鏈、超螺旋等各種結(jié)構(gòu)的DNA,因而也適合純化核酸。
●高動態(tài)載量、高流速、高產(chǎn)率
●更好的化學穩(wěn)定性和機械強度,更長的壽命
●剛性結(jié)構(gòu),保證了其在PH>6.5的范圍內(nèi)使用,可用NaOH清洗
●良好的批次重現(xiàn)性,容易放大化
●可隨意選用陽離子和金屬螯合兩個模式分離純化蛋白或其他分子
●能用于層析系統(tǒng)、重力流柱、AcroPrep多孔板等
應(yīng)用
●堿性蛋白的純化(免疫球蛋白)
●抗體純化
●酸性蛋白(白蛋白)
●去除DNA和內(nèi)毒素
●純化磷多肽
●分離純化復雜的蛋白混合物
●純化質(zhì)粒
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