5.糞便標(biāo)本的采集 糞便標(biāo)本于急性腹瀉期及未使用抗生素之前采取自然排出的糞便,挑選粘液、膿血部分,置無(wú)菌容器、保存液或*中??捎酶亻T拭子。不能立即送檢的標(biāo)本應(yīng)放入Cary-Blair*中。
(1)直接涂片檢查
臨床懷疑是霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌感染或菌群失調(diào)需要大致估計(jì)菌群比例、二重感染(偽膜性腸炎、真菌性或葡萄球菌性腸炎)時(shí)進(jìn)行直接涂片染色檢查。
霍亂弧菌的涂片檢查 取“米泔水”樣糞便或肛門拭子涂片2張,干燥后用乙醇或甲醇固定,分別進(jìn)行革蘭染色和1:10稀釋石炭酸復(fù)紅染色,用油鏡觀察有無(wú)革蘭陰性、魚群樣排列的弧菌。另外也可進(jìn)行懸滴法動(dòng)力試驗(yàn)和制動(dòng)試驗(yàn)。
菌群失調(diào)及菌交替癥 取糞便標(biāo)本直接涂片,進(jìn)行革蘭染色油鏡觀察,根據(jù)菌群的形態(tài)和染色特征可大致描述菌群的情況。疑為偽膜性腸炎的患者標(biāo)本中如發(fā)現(xiàn)大量革蘭陽(yáng)性呈葡萄狀排列的球菌,則可報(bào)告“找到革蘭陽(yáng)性呈葡萄狀排列的球菌”;如發(fā)現(xiàn)革蘭陽(yáng)性粗大桿菌、無(wú)莢膜,通常有位于菌體一端的卵圓形芽胞者,可報(bào)告“找到革蘭陽(yáng)性芽胞桿菌,疑似艱難梭菌”。
結(jié)核分枝桿菌 取半個(gè)指甲大小糞便塊,與飽和鹽水10~15ml攪和,靜置,1~2h后取zui上層液體作涂片,進(jìn)行抗酸染色檢查。
(2)分離培養(yǎng)
沙門菌屬和志賀菌屬 直接接種腸道強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基(SS瓊脂、木糖賴氨酸去氧膽酸鈉瓊脂)和弱選擇性培養(yǎng)基(如Mac Conkey、EMB、中國(guó)藍(lán)瓊脂)各1個(gè);攜帶者的檢查,可將糞便標(biāo)本接種于GN增菌液(適用于沙門菌屬和志賀菌屬)和亞硒酸鹽或四硫磺酸鹽增菌液(適用于沙門菌屬)增菌后轉(zhuǎn)種于腸道強(qiáng)和弱選擇性培養(yǎng)基上觀察菌落特征。
霍亂弧菌 可疑標(biāo)本接種于堿性蛋白胨水中進(jìn)行35℃增菌,同時(shí)接種含糖雙洗平板、*瓊脂平板或TCBS瓊脂平板。增菌培養(yǎng)6h后,取增菌液表層菌膜移種于上述平板中進(jìn)行分離培養(yǎng),同時(shí)取增菌液作革蘭涂片染色和懸滴法動(dòng)力試驗(yàn)和制動(dòng)試驗(yàn)。
副溶血性弧菌 取可疑糞便(或可疑食物)接種于副溶血性弧菌增菌液中,同時(shí)劃線接種于副溶血性弧菌選擇性平板和SS平板上。
腸致病性大腸埃希菌 取可疑糞便標(biāo)本接種在中國(guó)藍(lán)平板(或Mac Conkey平板或EMB平板)。
小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 將可疑標(biāo)本接種于新耶爾森菌選擇培養(yǎng)基(NYE)、Mac Conkey及SS瓊脂平板。帶菌者可將標(biāo)本接種于1/15mol/LpH7.4~7.8的PBS中,在4℃進(jìn)行冷增菌。
空腸彎曲菌 取可疑糞便或在Cary-Bair*中的糞便標(biāo)本接種于Camp-BAP血瓊脂或Skirrow血瓊脂,或接種于CEM增菌液在微需氧環(huán)境下培養(yǎng)18~24小時(shí)后接種上述平板,在微需氧環(huán)境下培養(yǎng)42~48h。
菌群失調(diào)及菌交替癥 要對(duì)糞便中的所有菌群進(jìn)行觀察,將糞便定量接種在腸道選擇性培養(yǎng)基、需氧和厭氧血平板,*鹽瓊脂,沙保弱培養(yǎng)基等,觀察各菌群的生長(zhǎng)情況,進(jìn)行鑒定后報(bào)告各菌群比例。懷疑艱難梭菌的菌交替癥時(shí),如為黃色、夾有偽膜的糞便應(yīng)立即接種CCFA平板,進(jìn)行厭氧培養(yǎng)。如為綠色、海水樣糞便,應(yīng)懷疑為*感染,接種*鹽瓊脂,有黃色菌落按葡萄球菌鑒定。如為真菌性腹瀉,常發(fā)生在抗生素使用之后,將標(biāo)本接種在沙保弱培養(yǎng)基及血平板上,進(jìn)行鑒定。
6.生殖道標(biāo)本
男性尿道、生殖器分泌物 用無(wú)菌棉簽將膿液采集在無(wú)菌試管中。由臨床醫(yī)師從肛門進(jìn)行前列腺按摩,收集前列腺液。
女性生殖道標(biāo)本 直視采集陰道后穹隆分泌物。盆腔膿腫的患者應(yīng)消毒陰道后從后穹隆穿刺抽取膿液。子宮分泌物的采集采用雙套管的方式插入子宮腔吸取分泌物。
外陰分泌物 對(duì)外陰部位的硬下疳,從其潰瘍底部擠出少許組織液,以潔凈玻片直接沾取,加蓋玻片后送檢。
涂片檢查 對(duì)一般細(xì)菌和淋球菌的檢查用革蘭染色;梅毒螺旋體用暗視野顯微鏡或鍍銀染色法檢查;結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行抗酸染色。
培養(yǎng)檢查 一般細(xì)菌培養(yǎng)用血平板和Mac Conkey平板各一個(gè);培養(yǎng)淋病奈瑟菌需要巧克力平板或卵黃雙抗平板.
7.膿液、胸腹水及分泌物等其它標(biāo)本
封閉性膿腫直接穿刺;疑為厭氧菌感染者,應(yīng)立即將注射器內(nèi)的空氣排空,將針頭插入橡皮塞中隔絕空氣;開放性膿腫或瘺管從深部采取標(biāo)本。標(biāo)本直接涂片革蘭染色發(fā)現(xiàn)細(xì)菌可以直接報(bào)告,然后用血平板接種培養(yǎng)。胸、腹水通過胸腔或腹腔穿刺獲得,注入無(wú)菌試管中送檢。