牛結(jié)核?。═B）酶聯(lián)免疫試劑盒

    ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。 　　

（一）　原理

　　ELISA是以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。 　　

ELISA檢測試劑盒組成:

1:濃縮洗滌液（50ml）20x

2.標本稀釋液（12ml）

3.終止液（12ml）

4.標準品（2管）

5.酶標抗體稀釋液體（12ml）

6.*抗體稀釋液（12ml）

7.包被酶標板一塊

8.坐標紙一張

9.封板紙一張

樣品類型（SAMPLE TYPES）：

   標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

   標本處理:

收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加*。

   ◇血清：

室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

   ◇血漿：

應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 （ 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心。

   ◇尿液、胸腹水、腦脊液：

用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

   ◇細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的 成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

   ◇組織標本：

切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ *）。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

   檢測原理：

采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

保存溫度：2-8℃保存6個月.

注意事項：

收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在 4 ℃ 備用，如有特殊 原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復(fù)凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時， -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分激素類標本需添加*。

   備注:以上為ELISA試劑盒通用說明書,不包括特別的試劑盒,具體的請參照每個產(chǎn)品的說明書