IL-2主要由活化的CD4+細(xì)胞產(chǎn)生，通過(guò)自分泌和旁分泌作用于分泌IL-2的細(xì)胞本身或鄰近的CD4+和CD8+細(xì)胞，是機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)中zui重要的調(diào)節(jié)因子。因此，IL-2活性的檢測(cè)已成為評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)之一。但體液中IL-2含量甚少，難以直接測(cè)定。通常檢測(cè)PHA和ConA等絲裂原誘導(dǎo)單個(gè)核細(xì)胞在體外產(chǎn)生IL-2的能力來(lái)反映。
體外誘生和制備IL-2可用正常組織細(xì)胞（如人脾臟、扁桃體、淋巴結(jié)）及外周血單個(gè)核細(xì)胞，大鼠和小鼠脾臟細(xì)胞，各種傳代細(xì)胞系（如人白血病Jurkat細(xì)胞系，小鼠胸腺瘤EL-4細(xì)胞系，長(zhǎng)臂猿淋巴肉瘤MLA-144細(xì)胞系等）和一些T細(xì)胞雜交瘤。
1．人外周血單個(gè)核細(xì)胞誘生IL-2
（1）無(wú)菌取靜脈血5mL，肝素抗凝。用淋巴細(xì)胞分層液密度梯度離心（2 000r／min×30min），分離單個(gè)核細(xì)胞。
（2）用Hanks液洗滌細(xì)胞2次，然后用含10％NBS的RPMI-1640*培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106／mL。
（3）于24孔培養(yǎng)板中，加入細(xì)胞懸液lmlJ孔，PHA 100pz／孔。
（4）37℃5％C0：條件下培養(yǎng)48h。
（5）吸出培養(yǎng)上清，2000r／rain離心20rain，收集上清，—20~C凍存待測(cè)。
2．小鼠和大鼠脾臟細(xì)胞誘生IL-2
（1）將小鼠拉頸致死，無(wú)菌操作取脾臟。仔細(xì)剪碎，加適量的Hanks液混懸，經(jīng)100目篩網(wǎng)過(guò)濾，獲得單個(gè)脾細(xì)胞：
（2）低滲或0．83％氯化銨處理，裂解殘余紅細(xì)胞。
（3）以含2％NBS的HBSS離心洗滌2次，用含10％NBS的RPMI-1640*培養(yǎng)液配制成5×106／mL脾細(xì)胞懸液，加入ConA使zui終濃度為5～10pg／mL。置37％，5％C02溫箱中培養(yǎng)24—48h（視細(xì)胞轉(zhuǎn)化情況而異）。
（4）離心沉淀，收集上清。—20~C凍存待測(cè)。
3．MLA-144細(xì)胞和EL-4細(xì)胞誘生ID2 MIA—144細(xì)胞可以自發(fā)分泌IL-2，按以下條件培養(yǎng)：起始細(xì)胞濃度為2X105／mL，終末濃度為1X106／mL，傳代時(shí)間為48h：
EL-4細(xì)胞在十四酰佛波乙酸酯（tetmdecanoylphorbolacetate，TPA）刺激下可產(chǎn)生價(jià)11,-2。TPA為10ng／mL，起始細(xì)胞濃度為106／mL，培養(yǎng)48h，收集上清：
4．注意事項(xiàng)
（1）誘生劑濃度、培養(yǎng)條件和細(xì)胞濃度對(duì)結(jié)果均有明顯影響，應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)以確定*實(shí)驗(yàn)條件。
（2）培養(yǎng)器皿和研磨條件：24孔培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞活率較高，但生長(zhǎng)稍慢。玻璃瓶培養(yǎng)有時(shí)會(huì)因玻璃質(zhì)量和清洗不凈引起細(xì)胞死亡，故應(yīng)注意采取相應(yīng)措施。大量培養(yǎng)時(shí)用大容量瓶比較方便，可減少操作中的污染。研磨組織可用玻璃勻漿器、不銹鋼網(wǎng)和毛玻璃
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