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MPO DRGelisa試劑盒說明書

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更新時間:2019-01-14 11:15:56瀏覽次數(shù):557次

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MPO DRGelisa試劑盒說明書

Rat MPO  ELISA Kit

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大鼠髓過氧化物酶 (MPO)DRGelisa試劑盒 Rat MPO  ELISA Kit
MPO DRGelisa試劑盒說明書【實驗用途】髓過氧化物酶(MPO)是一種血色素蛋白(分子質(zhì)量 118kDa),含一對重鏈和輕鏈 ,它存于嗜中性多核細胞的嗜天青顆粒和巨嗜細胞中,其功能為將氯化物和過氧化氫轉(zhuǎn)變?yōu)榇温人猁}。在炎癥狀態(tài)下,它被釋放入細胞外液進入循環(huán),因此傳統(tǒng)認為是一種殺菌的酶,在人體的天然防御 、免疫功能方面起重要作用。此酶參與含低密度脂蛋白(1ow density li—poprotein,LDL)的脂類氧化。以鄰位二氨基苯胺鹽酸鹽為底物加過氧化氫可定量血中和組織中的酶活性。MPO能氧化低密度脂蛋白(1ow density lipoprotein cholesterol,LD—LC),從而有利于巨噬細胞攝取LDLC并轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽毎?;氧化高密度脂蛋白(hi density lipoprotein,HDL),使其失去正常的功能;另外,MPO激活金屬蛋白酶、使粥樣硬化斑塊表 面不穩(wěn)定趨于破裂;同時 MPO還催化消耗 內(nèi)皮衍生的一 氧化氮(nitric oxide,NO),從而減少 NO的生物利用度,損害 N0的血管擴張和抗炎功能Is]。關(guān)于 MPO的測定方法有多 種,紫外分光光度比色法、流式細胞儀和免疫組織化學(xué)染色 法 用來檢測循環(huán)中和組織中多形核細胞的 MPO活性,而 近期出現(xiàn)的酶聯(lián)免疫的定量法可測定血液中MPO的濃度。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)(biotin)標記。樣品和標記抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
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操作流程:
(1)MPO DRGelisa試劑盒說明書待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。 
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 
(6)洗板,同(4)。 
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 
(9)洗板,同(4)。 
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
試劑盒組成及試劑配制 :
1.MPO DRGelisa試劑盒說明書 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。 
2. 標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶
4. 標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
白介素6IL6檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T

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周期素依賴性激酶抑制因子3CDKN3檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T

1PRM1檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T

2PRM2檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T

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夜盲蛋白NYX檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T

卷曲同源物1FZD1檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
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pET-44 Ek/LIC 2 ug pET-44 Ek/LIC 低溫運輸,-20℃保存

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MPO DRGelisa試劑盒說明書兔肺微血管內(nèi)皮細胞原代細胞 * 10 µg

人毛細胞cDNA   HHDPC cDNA 原裝/進口 5 x 10^5 cells/vial

人生發(fā)基質(zhì)細胞cDNA   HHGMC cDNA  5 x 10^5 cells/vial

人外根殼細胞cDNA   HHORSC cDNA * 5 x 10^5 cells/vial

人內(nèi)根殼細胞cDNA   HHIRSC cDNA 原裝/進口 5 x 10^5 cells/vial

人淋巴內(nèi)皮細胞cDNA   HLEC cDNA  20 reactions

人淋巴成纖維細胞cDNA   HLF cDNA * 200 µg

人口腔角質(zhì)細胞cDNA   HOK cDNA 原裝/進口 200 µg

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