魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中魚 Bcl-2 相關(guān) X(BAX)。用純化的魚Bcl-2相關(guān) X
(BAX)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入Bcl-2(BAX),再與 HRP標(biāo)記的 Bcl-2相關(guān)X (BAX)抗體 ,形成抗體-抗原-酶相關(guān)X標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 Bcl-2相關(guān)X (BAX)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中魚 Bcl-2 相關(guān) X(BAX)濃度。
魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)ELISA試劑盒操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50?l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40?l,然后再加待測樣品 10?l(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后37℃溫育30分鐘。30倍稀釋后備用
配液:將 30倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體甩干,每孔加滿洗滌液,靜重復(fù) 5次,拍干。30秒后棄去,如此
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50?l,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50?l,再加入顯色劑 B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),牛病毒性腹瀉抗體(BVDV Ab)ELISA試劑盒在坐標(biāo)紙上,魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)ELISA試劑盒根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
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魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)ELISA試劑盒