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胸腺激酶缺陷細(xì)胞;143BTK-

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更新時間:2021-04-07 21:17:31瀏覽次數(shù):642次

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公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:

產(chǎn)品名稱

生長特性

貨號

胸腺激酶缺陷細(xì)胞;143BTK-

貼壁生長

EY-X63624

細(xì)胞名稱  胸腺激酶缺陷細(xì)胞;143BTK-
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 143B細(xì)胞是一株人的胸腺激酶缺陷細(xì)胞系,由WistarInstitute制備,為美國細(xì)胞系,僅可作為研究用,不能用于商業(yè)目的。

培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代

傳代情況: C97

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 陰性
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Stenotrophomonas maltophilia (Hugh) Pallero ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;Fi-14F1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Arthrobacter ilicis (Mandel et al.) Collins ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;2B5 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Zygosaccharomyces rouxii (Boutroux) Yarrow, ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;1D7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Dichotomicrobium thermohalophilum Hirsch an ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;4B7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

freeze-dried細(xì)胞名稱: GY-PCV2-PK15細(xì)胞株;GY-PCV2-PK15 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;8F9H3 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Torula herbarum Link : Fries細(xì)胞名稱: 抗人CD146雜交瘤細(xì)胞株;4-F10(IgG1) MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;5B8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Blastobotrys proliferans Marvanova細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;5D9 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Fusarium culmorum (Smith) Saccardo細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;8H7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Rattus norvegicus, rat細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;STMN1-3P9 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Penicillium corylophilum Dierckx, anamorph細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;P24-3B9 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;P24-2F4 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Rattus norvegicus, rat細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;NGAL-4F6 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)11%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;NGAL-3B5 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;1A4 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
胸腺激酶缺陷細(xì)胞;143BTK-假單胞cfc選擇性培養(yǎng)基添加劑規(guī)格:1ml/支*5用途:每支添加于200ml HB8689中

布魯氏菌培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于布魯氏菌分離培養(yǎng)

蛋白質(zhì)快速檢測試劑盒拉丁屬名:食物種類: 乳及乳制品、奶粉、液態(tài)奶。

DNA酶瓊脂規(guī)格:100g用途:用于核糖核酶檢測

225ml 緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋規(guī)格:10個/包用途:用于沙門氏菌、阪崎桿菌制樣和前增菌培養(yǎng)

BBL液體培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于雙歧桿菌增菌培養(yǎng)
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的  *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

 

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