植物三磷酸腺苷（ATP）ELISA試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定植物組織，細胞及其它相關(guān)樣本中植物三磷酸腺苷(ATP)含量。

實驗原理：

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中植物三磷酸腺苷(ATP)水平。用純化的植物三磷酸腺苷(ATP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入三磷酸腺苷(ATP)，再與HRP標記的三磷酸腺苷(ATP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的三磷酸腺苷(ATP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中植物三磷酸腺苷(ATP)濃度。

試劑盒組成：

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存

說明書 1份 1份  

封板膜 2片（48） 2片（96）  

密封袋 1個 1個  

酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

標準品：225 ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存

標本要求： 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

植物三磷酸腺苷（ATP）ELISA試劑盒操作步驟：

?標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為150 ng/L,100 ng/L,50 ng/L,25 ng/L,12.5 ng/L）。

?加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

?溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

?配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

?洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

?加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

?溫育：操作同3。

?洗滌：操作同5。

?顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

?終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

?測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

植物三磷酸腺苷（ATP）ELISA試劑盒注意事項：

?試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

?濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

?各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。

?請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

?封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

?底物請避光保存。

?嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

?所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

?本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，    

在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD      

值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋      

倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      

代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。                  

（此圖僅供參考）

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%

檢測范圍：                                              

10 ng/L -300 ng/L

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月