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所 在 地上海
更新時(shí)間:2017-03-20 13:08:05瀏覽次數(shù):1720次
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信帆生物提供PCR技術(shù)服務(wù),PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè)
逆轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription PCR)或者稱反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)DNA,再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增。
由一條RNA單鏈轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA(cDNA)稱作“逆轉(zhuǎn)錄”,由依賴RNA的DNA聚合酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)來(lái)完成。
隨后,DNA的另一條鏈通過(guò)脫氧核苷酸引物和依賴DNA的DNA聚合酶完成,隨每個(gè)循環(huán)倍增,即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解,留下互補(bǔ)DNA。
RT-PCR的指數(shù)擴(kuò)增是一種很靈敏的技術(shù),可以檢測(cè)很低拷貝數(shù)的RNA。RT-PCR廣泛應(yīng)用于遺傳病的診斷,并且可以用于定量監(jiān)測(cè)某種RNA的含量。檢測(cè)基因表達(dá)的方法,參見(jiàn)Northern Blot法。
RT-PCR的關(guān)鍵步驟是在RNA的反轉(zhuǎn)錄,要求RNA模版為完整的且不含DNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。常用的反轉(zhuǎn)錄酶有兩種,即鳥(niǎo)類(lèi)成髓細(xì)胞性白細(xì)胞病毒(avian myeloblastosis virus,AMV)反轉(zhuǎn)錄酶和莫羅尼鼠類(lèi)白血病病毒(moloney murine leukemia virus,MMLV)反轉(zhuǎn)錄酶。
在完成逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程之后,通過(guò)PCR進(jìn)行定量分析的時(shí)候,隨著技術(shù)的發(fā)展,real-time PCR(實(shí)時(shí)熒光PCR)或ddPCR(數(shù)字PCR)技術(shù)也被用來(lái)做定量分析,它們比普通PCR進(jìn)行定量分析時(shí)靈敏度更高,定量更精確。
oligo:多聚體,相當(dāng)于mRNA引物
AMV RT:禽類(lèi)成髓細(xì)胞瘤病毒逆轉(zhuǎn)錄酶
MMLV RT:莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶
dNTPs:脫氧核苷酸
RNase:RNA水解酶
PCR Buffer:RT-PCR緩沖液
MgCl2:2價(jià)鎂離子
信帆生物提供PCR技術(shù)服務(wù),PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè)
一、服務(wù)介紹
實(shí)時(shí)PCR(real-time PCR),屬于定量PCR(Q-PCR)的一種,以一定時(shí)間內(nèi)DNA的增幅量為基礎(chǔ)進(jìn)行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對(duì)定量??蓹z測(cè)mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷貝數(shù)變化。
二、服務(wù)流程
1、引物設(shè)計(jì)與合成
2、DNA/RNA抽提
3、反轉(zhuǎn)錄(針對(duì)RNA)
4、上機(jī)定量分析
三、客戶提供
1、全血、組織或細(xì)胞。細(xì)胞:細(xì)胞數(shù)>107,組織:總量>200mg,DNA或RNA樣品:總量>5ug
2、引物,或由信帆生物提供。
3、基因信息:目的基因名稱、物種和序列(或GenBank Accession Number)。
四、交付內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:詳細(xì)操作步驟
原始數(shù)據(jù):溶解曲線圖,擴(kuò)增曲線圖,ct值
信帆生物公司主要代理產(chǎn)品:
ELISA試劑盒:進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清:胎牛血清,人血清,動(dòng)物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品:進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體:一抗,二抗,流式抗體等。
放免試劑盒:進(jìn)口放免試劑盒,國(guó)產(chǎn)放免試劑盒,進(jìn)口美國(guó)鳳凰等放免試劑盒。
實(shí)驗(yàn)室代測(cè)服務(wù):放免代測(cè),WB實(shí)驗(yàn),免疫組化代測(cè),熒光定量PCR代測(cè),病理細(xì)胞染色代測(cè),生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)等。
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