植物玉米素(Z)ELISA試劑盒
標記的免疫測定
如上所述,免疫測定是一種很敏感的測定方法,抗原抗體反應(yīng)后直接測定形成的沉淀或濁度,敏感度可達5~10μg/ml,但在臨床檢驗中,某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平,因此要尋找增加敏感度的方法。標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標記,通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和酶免疫測定中,標記物分別為放射性核素和酶,zui后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量,敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標記免疫測定中,一般加入過量的標記試劑以保證與待測物*反應(yīng)。以標記抗體(Ab※)檢測抗原(Ag)為例,反應(yīng)式如下:
Ag+ Ab※ → AgAb※+ Ab※
在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※,如不將兩者分離而測定標記物,測得的結(jié)果將為兩者之和。因此,游離標記物與結(jié)合標記物的分離是標記免疫測定中的重要步驟??刹捎枚喾N手段,固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上,然后再與標記的抗原或抗體直接反應(yīng),結(jié)合的標記物被固定在載體上,而游離的標記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab※除去,結(jié)合標記物的測定可在固相上進行。
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臨床標本的收集和保存
用于ELISA測定的臨床標本zui為常用的是血清(漿),有時因為特定的檢測目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集,要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點之間,會有一峰值出現(xiàn):生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,在測定此類激素時,有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測定值。又如當從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r,血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測,應(yīng)根據(jù)藥代動力學選擇服藥后的zui適時間抽血檢測。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢測的血清標本的收集則沒有時間和體位方面的影響
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