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人膽囊收縮素/腸促*肽(CCK)ELISA試劑盒說明書
規(guī)格:48T/96T
樣本:體液,血清,血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液,組織勻漿,心房水標(biāo)本等
所需樣本體積: 50-100ul
反應(yīng)時(shí)間: 1-5h
檢測波長: 450 nm
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
用途: For research use only. Not for diagnostic use.(只能用于科研,不可用于臨床診斷)
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人膽囊收縮素/腸促*肽(CCK)ELISA試劑盒說明書
一、雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
二、間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;
4.(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
6.zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
人膽囊收縮素/腸促*肽(CCK)ELISA試劑盒說明書
血清:全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。血漿:抗凝劑*使用EDTA,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂標(biāo)本。其它生物標(biāo)本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融,6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,請根據(jù)實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù))。
人膽囊收縮素/腸促*肽(CCK)ELISA試劑盒說明書
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