*脫羧酶-65抗體廠家供應(yīng)，*脫羧酶-65抗體價格說明書，誠凜生物給您提供zui完善的與服務(wù)！
■中文名稱：
■英文名稱：Anti-GAD-65 (glutamate decarboxylase)
■產(chǎn)品貨號：CL-0325T
■產(chǎn)品規(guī)格：0.1ml/100ug  0.2ml/200ug
■濃度說明：1mg/1ml
■保存條件:Store at -20 °C
■產(chǎn)品品牌：Abcam、santa、上海誠凜生物
■產(chǎn)品性狀：凍干粉或液體
■克隆性：多克隆、單克隆
■來源物種：兔、小鼠、羊、大鼠
■交叉反應(yīng):Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Guinea Pig
■產(chǎn)品應(yīng)用：WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-916
Western blot is a powerful technique in that; it leads to simultaneously detection of a specific protein by means of its antigenicity and its molecular mass. The proteins are first separated by mass using SDS-PAGE, transferred from gels onto membranes and then specifically detected in the immunoassay step. Information on activation status (i.e. enzyme pro-form vs. active species, unless specific antibodies against the pro species are available), oligomeric arrangement and post-translational modifications can also be deduced from this technique.
The efficiency of protein transfer from the SDS-PAGE gel to the support membranes can be affected by the gel thickness and the total acrylamide concentration. Transfer buffers can also affect the efficiency of protein migration through the gel. While methanol is necessary to prevent gel swelling with heating, and to keep protein adsorbed to membrane, methanol-containing buffers often result in the decrease in pore size and may even precipitate proteins within the gel. Poor transfer can be remedied by using methanol-free transfer buffer.
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■免疫組化和Western Blot可以用同一種抗體嗎？
解答：免疫組化時抗體識別的是未經(jīng)變性處理的抗原決定簇（又稱表位），有些表位是線性的，而有的屬于構(gòu)象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，煮后變性會消失。如果你所用的抗體識別的是蛋白上連續(xù)的幾個氨基酸，也就是線性表位，那么這種抗體可同時用于免疫組化和Western，而如果抗體識別構(gòu)象形表位，則只能用于免疫組化。一般抗體說明書上都有注明此種抗體識別的氨基酸區(qū)間。（限于單抗）
■Western Blot 中抗體的重復(fù)應(yīng)用問題
解答：抗體工作溶液一般不主張儲存反復(fù)使用，但是如抗體比較珍貴，可反復(fù)使用2－3次。稀釋后應(yīng)在2－3天內(nèi)使用，4℃保存，避免反復(fù)凍融。

【多克隆抗體的制備】
⒈ 實驗動物
成年兔。
⒉ 實驗器材
特制兔盒；刀片；25G針頭；1ml注射器；20 ml 血液收集管；藥鏟；離心機以及塑料離心管；加樣器及加樣管；燒杯。
⒊ 實驗試劑
⑴ 抗原；乙醇；20mM 磷酸緩沖溶液pH7.2。
⑵ 福氏*佐劑和福氏不*佐劑
（實驗方法）
⒈ 抗原的制備
抗原制備的主要目的在于在免疫動物體內(nèi)產(chǎn)生zui強、zui適當?shù)目贵w。由于純化的抗原適合產(chǎn)生抗體，因此在注射前通常采用一些經(jīng)典的方法，比如柱層析、分級萃取、亞細胞分離等進行抗原的分離和純化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中為可見的單一帶，抗原從凝膠中的抽提可作為純化的zui后一個步驟。
⒉ 預(yù)放血
輕輕的將兔子放在特制兔盒中，處于放松狀態(tài)的兔子采血會較容易。按壓兔子耳根部直至血管突出,然后將針頭插入耳部血管的中上部，觀察到進針后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。結(jié)束收集后，退出針頭并按壓傷處以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒溫箱中放置30分鐘以防止激活補體系統(tǒng)，再將試管在4°C放置過夜使血液凝固。用藥鏟將血凝塊從管壁上撥落，將血液轉(zhuǎn)移至塑料離心管中，4°C，10,000g離心10分鐘，收集上清液在4°C保存。
⒊ 注射抗原
⑴ 準備兩只成年兔，將100µg抗原/兔溶入1ml磷酸緩沖溶液中待用。在1ml福氏不*佐劑中加入分枝桿菌制成*佐劑，并加入1ml抗原溶液，劇烈震蕩使之充分乳化，用3ml注射器抽取該乳化液，接上25G針頭，排除注射器中的氣泡。從籠中取出兔子放在平坦處，在4個不同的部位進行皮下注射，兩處在后背，兩處在大腿處。撫去注射處的兔毛并用乙醇消毒暴露的皮膚。捏出皮膚，將針頭以相對皮膚15度的角度進針，進針深度為1cm-2cm，小心不要刺入肌肉中，在4個不同部位分別各注射約500µl抗原溶液。注射結(jié)束后，將針在注射處放置幾秒鐘后再輕輕拔出，并用乙醇在注射處消毒。在4個部位重復(fù)上述操作。用相同方法免疫另一只家兔。
⑵ 每4-6周注射抗原，并在注射后的7天-10天按照步驟2收集血液。將收集的血液與注射前收集的血液進行比較，檢查是否有抗體產(chǎn)生。待確定產(chǎn)生抗體后可大量收集血液，但每只兔子收集血液不能多于40ml以防止休克。
⒋ 收集血液
⑴ 將家兔輕輕放入固定架上,二甲苯涂于耳部血管的上中部，用刀片傾斜45°在該處切出0.23cm-0.3cm的切口使血液能自由的流出。用消毒后的管收集滴出的血液，若在結(jié)束之前出現(xiàn)凝固可用溫水輕擦切口處，再繼續(xù)收集。收集適量血液后可用消毒后的紗布輕擦患處，輕按患處10秒-20秒確定血流停止后方可結(jié)束。
⑵ 將血液在37°C恒溫箱中放置30分鐘，再在4°C放置過夜。用藥鏟將血凝塊從管壁上撥落，將血液轉(zhuǎn)移至塑料離心管中，4°C，10,000g離心10分鐘，收集上清液即為抗血清，可在-20°C保存數(shù)年。
（實驗結(jié)果）
利用蛋白質(zhì)免疫印跡法或免疫電泳方法檢查抗體產(chǎn)生情況。

【單克隆抗體的優(yōu)點與局限性】：單克隆抗體和多克隆抗體各有其優(yōu)點和局限性，只有對它們有全面的了解，才能根據(jù)不同應(yīng)用領(lǐng)域的要求，正確的選擇和應(yīng)用。
 1.單克隆抗體的優(yōu)點： （1）雜交瘤可以在體外“*”地存活并傳代，只要不發(fā)生細胞株的基因突變，就可以不斷的生產(chǎn)高特異性、高均一性的抗體。 （2）可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。 （3）由于可能得到“無*”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學(xué)分析方法，如IRMA和ELISA等。 （4）由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學(xué)功能，可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療。
 2.單克隆抗體的局限性： （1）單克隆抗體固定的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍。由于單克隆抗體不能進行沉淀和凝集反應(yīng)，所以很多檢測方法不能用單克隆抗體完成。（2）單克隆抗體的反應(yīng)強度不如多克隆抗體。 （408）制備技術(shù)復(fù)雜，而且費時費工，所以單克隆抗體的價格也較高。
單抗：識別單個抗原表位，所以特異性高。但如果所識別的抗原表位被破壞，則會影響實驗結(jié)果，這也是單抗的缺點之一；   
多抗：雖然存在交叉反應(yīng)的問題，但由于識別多個抗原表位，所以即使有少數(shù)幾個抗原表位被破壞，仍然不會影響實驗結(jié)果，這是多抗的優(yōu)點之一。  
二者各有利弊,一般說來只要說明書上標明可以做組化就都可以。  
專門用于免疫組化的抗體多為IgG類單抗，識別抗原的空間構(gòu)象。需要結(jié)合是否同時做WESTERN或熒光或沉淀等做綜合的選擇。單抗多是鼠源，種植在腹腔的雜交瘤細胞，通過腹水獲得；多抗是兔羊源，通過免疫動物，從血清中獲得。